CRISPR-Cas9技术构建染色体易位干细胞及动物模型的方法

摘要：

本发明涉及一种染色体易位干细胞模型及动物模型制备方法，主要通过CRISPR/Cas9技术诱导干细胞中特异位点染色体易位发生及细胞模型制备，以及进一步利用胚胎干细胞技术构建携带特异位点染色体易位的动物模型的方法。具体的，通过向干细胞中同时导入Cas9和针对两个目的染色体位点的gRNA，可以人工诱导特异位点的染色体易位，再经过筛选，可以得到携带该染色体易位的细胞模型。而携带该染色体易位的动物胚胎干细胞，还可以进一步通过嵌合体技术得到携带特异位点的染色体易位的动物模型。对于研究染色体易位，融合基因的功能，染色体相互作用的研究，以及药物的筛选评价，都有较大应用前景。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201510075127.4

申请日期：2015-02-12

公开/公告号：CN104726494A

公开/公告日：2015-06-24

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

申请/专利权人:中国人民解放军第二军医大学

发明/设计人:刘厚奇;蒋俊锋;应其龙;王越;张莉

主申请人地址:200433 上海市杨浦区翔殷路800号

专利代理机构:上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268

代理人:赵青

国别省市代码:上海;31

权利要求：

一种在干细胞中通过CRISPR‑Cas9技术诱导特异位点的染色体易位的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：A、确定想要诱导的染色体易位的两个染色体位点，标记为chr‑site1、chr‑site2；根据目标染色体位点chr‑site1、chr‑site2分别设计gRNA的识别序列，标记为gRNA‑1、gRNA‑2；B、构建表达gRNA‑1、gRNA‑2的表达载体；C、将步骤B得到的表达gRNA‑1、gRNA‑2的表达载体，以及含Cas9基因的表达载体共转染目标干细胞。