CRISPR/Cas9特异性敲除乙型肝炎病毒的方法以及用于特异性靶向HBV DNA的gRNA

摘要：

本发明涉及分子生物学与生物医药技术领域，具体的说，本发明涉及基于CRISPR系统的gRNA序列及其组合在乙型肝炎病毒治疗中的应用。本发明根据CRISPR gRNA的设计原则以及不同基因型HBV序列的保守性区域，设计了8种指导RNA（gRNA），并且将其构建在PX330表达载体上。在细胞模型和小鼠模型中利用这8条gRNA，及其组合指导的CRISPR/Cas9系统，可以有效的抑制乙型肝炎病毒基因的表达和复制。多条gRNA联合使用可以得到更好的效果，且可以更好地抑制不同基因型的HBV复制。这一系统有易于操作，对HBV复制的抑制效率高，对于多种基因型适用的特点。因此，本发明涉及的gRNA及其组合有望在制备治疗乙型肝炎病毒新型药物中得到应用。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201410851870.X

申请日期：2014-12-30

公开/公告号：CN104498493A

公开/公告日：2015-04-08

主分类号：C12N15/11(2006.01)I

申请/专利权人:武汉大学

发明/设计人:陈宇;郭德银;郝瑞栋;刘杏

主申请人地址:430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学

专利代理机构:武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222

代理人:张火春

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

在CRISPR‑Cas9特异性敲除乙型肝炎病毒cccDNA中用于特异性靶向乙型肝炎病毒cccDNA的gRNA，所述gRNA在乙型肝炎病毒cccDNA上的靶序列符合5’‑ N (20)‑NGG3’ 或者5’‑CCN‑ N (20)‑3’的序列排列规则，在HBV cccDNA上的靶序列是唯一的，其特征在于：所述gRNA在HBV cccDNA的靶向位点位于在不同基因型和亚型HBV的基因序列中都保守的区域。