HRM技术检测氯吡格雷用药相关基因多态性的方法
本发明公开了一种HRM技术检测氯吡格雷用药相关基因多态性的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：采用硅胶吸附法抽提被测者口腔上皮细胞/外周血细胞样本的基因组DNA，设计包含目标位点的检测引物，根据HRM技术对PCR扩增后的基因序列进行位点分型。本发明灵敏度高、特异性好，检测速度快，可用于评估患者使用氯吡格雷治疗的有效性，从而达到合理有效地个体化用药。
发明专利
CN201410815918.1
2014-12-25
CN104450935A
2015-03-25
C12Q1/68(2006.01)I
上海中优医药高科技有限公司
张奕;毛丹丹;卞雪莲
200444 上海市宝山区沪太路3100号E座4楼
上海;31
一种HRM分析技术检测氯吡格雷用药相关基因多态性的方法，其特征在于，具体步骤为：第一步： 采用硅胶吸附法抽提被测者口腔上皮细胞/外周血细胞样本的基因组DNA，电泳凝胶成像法对DNA的浓度和纯度作检测，待测样本浓度标化到10ng/ul；第二步：采用在线软件Primer 3设计HRM引物，确定最佳引物为18‑25bp大小，PCR产物长度80‑150bp，相关引物信息如下：CYP2C19 G681A引物序列：G681A‑F：TGCAATTTTCCCACTATCATTGG681A‑R：TTGGTGTTCTTTTACTTTCTCCAACYP2C19 G636A引物序列：G636A ‑F：CGTTTCGATTATAAAGATCAGCAG636A ‑R：AAAGACTGTAAGTGGTTTCTCAGGAABCB1 C3435T引物序列：C3435T‑F：CCTGTTTGACTGCAGCATTGC3435T‑R：GCTCCCAGGCTGTTTATTTG第三步：在每一个PCR反应孔中依次加入Type‑it HRM PCR Mix 7.5ul，正、反向引物溶液各0.5ul（10umol/L），检测样品2ul，用灭菌重蒸馏水补足15ul；在Rotor‑Gene Q上进行反应，PCR反应条件为92‑97℃变性5‑15分钟，92‑97℃变性10‑30秒，57‑65℃退火10‑30秒，70‑75℃延伸10‑30秒，30‑50个循环；HRM反应条件：92‑97℃变性1分钟，40℃复性1分钟，初始熔解温度60‑65℃开始程序升温熔解至95℃，过程中实时监测荧光信号，30‑50次每秒；第四步：应用Rotor‑Gene Q软件分析HRM结果，通过标准曲线基于曲线偏移（纯合子）和曲线形状变化（杂合子）展现不同的基因型；定义已知样本基因型后，软件会自动调出所有检测样本的基因型。