hTERT介导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建

摘要：

本发明涉及用于医学领域的hTERT介导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是以内切酶EcoR I和Xho I双酶切质粒pCIneo-hTERT和载体pLXSNneo，以Ligation Mix连接经PCR扩增、凝胶电泳分离的hTERT和pLXSNneo酶切产物，构建pLXSNneo-hTERT重组子，转化DH5a感受态细胞以纯化扩增并挑取耐氨苄青霉素菌落抽提质粒，以脂质体转染离体传代呈对数生长的T淋巴细胞，使重组子与细胞的DNA整合，并扩大培养经G418筛选含阳性重组子的细胞，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞端粒酶活性、hTERT mRNA表达、免疫组化、细胞增殖周期及其凋亡率符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为hTERT介导体外研究T淋巴细胞模型冻存于液氮，为从细胞水平在体外长期研究相关疾病的发病机制奠定基础。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310407539.4

申请日期：2013-09-01

公开/公告号：CN104419726A

公开/公告日：2015-03-18

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

申请/专利权人:翁炳焕

发明/设计人:翁炳焕;徐向荣;沈国松;李晓;严恺;黄荷凤

主申请人地址:317300 浙江省仙居县城关水阁路1号仙居县人民医院

国别省市代码:浙江;33

权利要求：

一种用于医学领域的hTERT介导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是以内切酶EcoR I和Xho I双酶切质粒pCIneo‑hTERT和载体pLXSNneo，以Ligation Mix连接经PCR扩增、凝胶电泳分离的hTERT和pLXSNneo酶切产物，构建pLXSNneo‑hTERT重组子，转化DH5a感受态细胞以纯化扩增并挑取耐氨苄青霉素菌落抽提质粒，以脂质体转染离体传代呈对数生长的T淋巴细胞，使重组子与细胞的DNA整合，并扩大培养经G418筛选含阳性重组子的细胞，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞端粒酶活性、hTERT mRNA表达、免疫组化、细胞增殖周期及其凋亡率符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为hTERT介导体外研究T淋巴细胞模型冻存于液氮，为从细胞水平(替代人体或动物直接试验)在体外长期研究相关疾病的发病机制奠定基础。