Line-1基因甲基化定量检测方法

摘要：

本发明公开了一种Line-1基因甲基化定量检测方法，具有如下步骤：①对待测样本进行处理，得到样本模板；②设计并合成Line-1基因甲基化引物和Line-1基因未甲基化引物；③分别用步骤②的甲基化引物和未甲基化引物对步骤①的样本模板进行PCR扩增反应，并分别得到相应的PCR扩增产物；④对分别对步骤③得到的PCR扩增产物进行处理，并分别得到相应的标准品模板；⑤分别对步骤①的样本模板以及步骤④的标准品模板进行实时荧光定量PCR检测，并计算出甲基化程度。本发明针对Line-1基因设计出了甲基化引物和未甲基化引物，这样可以利用MSP法和实时荧光定量PCR法对Line-1基因甲基化进行定性定量检测。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310106663.7

申请日期：2013-03-28

公开/公告号：CN103255210A

公开/公告日：2013-08-21

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:常州市肿瘤医院

发明/设计人:张长松;凌扬;朱长太;朱静;刘永萍;孔颖泽

主申请人地址:213002 江苏省常州市钟楼区怀德北路1号

专利代理机构:常州市江海阳光知识产权代理有限公司 32214

代理人:孙晓晖

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

一种Line‑1基因甲基化定量检测方法，具有如下步骤：①对待测样本进行处理，得到样本模板；②设计并合成Line‑1基因甲基化引物和Line‑1基因未甲基化引物；③分别用步骤②的甲基化引物和未甲基化引物对步骤①的样本模板进行PCR扩增反应，并分别得到相应的PCR扩增产物；④分别对步骤③得到的PCR扩增产物进行处理，并分别得到相应的标准品模板；⑤分别对步骤①的样本模板以及步骤④的标准品模板进行实时荧光定量PCR检测，并计算出甲基化程度；其特征在于：步骤②中所述的Line‑1基因甲基化引物如下：Line‑1基因甲基化正向引物：CGCGAGTCGAAGTAGGGC；Line‑1基因甲基化反向引物：ACCCGATTTTCCAAATACGACCG；扩增片段长度为110bp；步骤②中所述的Line‑1基因未甲基化引物如下：Line‑1基因未甲基化正向引物：TGTGTGTGAGTTGAAGTAGGGT；Line‑1基因未甲基化反向引物：ACCCAATTTTCCAAATACAACCATCA；扩增片段长度为110bp。