(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法

摘要：

一种(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其以(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯为底物，该底物在生物催化剂的作用下，与氰化钠反应生成目标产物(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯，所述的生物催化剂为重组卤代醇脱卤酶，所述的反应在pH为6-8的水相中进行。本发明通过采用重组卤代醇脱卤酶，使得底物浓度提高，酶用量降低，从而降低了生产成本，并且本发明通过对工艺的优化，使得产品的纯度和收率都有所提高。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210556375.7

申请日期：2012-12-20

公开/公告号：CN103014082A

公开/公告日：2013-04-03

主分类号：C12P13/00(2006.01)I

申请/专利权人:苏州汉酶生物技术有限公司

发明/设计人:鞠鑫;尹将来;张超

主申请人地址:215600 江苏省苏州市张家港市国泰北路1号F栋2楼

专利代理机构:苏州创元专利商标事务所有限公司 32103

代理人:孙仿卫%汪青

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

??一种(R)??4??氰基??3??羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其以(S)??4??氯??3??羟基丁酸乙酯为底物，该底物在生物催化剂的作用下，与氰化钠反应生成目标产物(R)??4??氰基??3??羟基丁酸乙酯，其特征在于：所述的生物催化剂为重组卤代醇脱卤酶，所述的重组卤代醇脱卤酶的制备方法为：将卤代醇脱卤酶单菌落接种到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基中，于30??40℃下摇床活化8??12小时，将活化后得到的培养物转接到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基中，于30??40℃下扩大培养至OD600值达到0.6??0.8，加入诱导剂，于25??35℃继续培养8??12小时，离心收集沉淀物，加入磷酸盐缓冲液得悬浮液，将悬浮液置于冰浴中超声波破碎8??12分钟，再离心，分离上清液，将上清液预冻至温度为??10~??25℃，然后再冻干24??48小时，即得重组卤代醇脱卤酶，所述的反应在pH为6??8的水相中进行。