H₅N₁亚型禽流感病毒反转录环介导的体外等温扩增检测方法和试剂盒

摘要：

本发明公开了H5N1亚型禽流感病毒的反转录环介导的体外等温扩增检测技术（RT-LAMP）检测方法和试剂盒，通过对H5N1亚型禽流感病毒HA基因序列的分析，选出高度保守且特异的核苷酸区域，设计了三对特异性引物，其中所用的外引物分别含有Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的序列；内引物分别含有Seq ID No.3和Seq ID No.4及Seq ID No.5和Seq ID No.6所示的序列；环引物分别含有Seq ID No.7和Seq ID No.8所示的序列。本发明的方法和试剂盒能够特异性地检测出鼻咽拭子、细胞培养液、组织悬液等多种样品中的H5N1亚型禽流感病毒；灵敏度高，操作方便快捷。本发明所述的H5N1亚型禽流感病毒RT-LAMP检测试剂包含三对特异性引物。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210298698.0

申请日期：2012-08-21

公开/公告号：CN103290140A

公开/公告日：2013-09-11

主分类号：C12Q1/70(2006.01)I

申请/专利权人:秦智锋

发明/设计人:秦智锋;孙洁;卢体康;曾少灵;林庆燕;吕建强;杨俊兴;刘建利;花群义;廖立珊

主申请人地址:518033 广东省深圳市福田区福强路1011号A楼1006

专利代理机构:广州新诺专利商标事务所有限公司 44100

代理人:刘杉%刘菁菁

国别省市代码:广东;44

权利要求：

H5N1亚型禽流感病毒的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括一对外引物、一对内引物及一对环引物，所述一对外引物为分别具有Seq ID No.1所示序列的前外引物F3和具有Seq ID No.2所示序列的后外引物B3，所述一对内引物包括前内引物FIP和后内引物BIP，所述前内引物FIP含有Seq ID No.3和Seq ID No.4所示的序列，Seq ID No.3和Seq ID No.4之间通过0～4个碱基相连；所述后内引物BIP含有Seq ID No.5和Seq ID No.6所示的序列，Seq ID No.5和Seq ID No.6之间通过0～4个碱基相连,所述一对环引物为分别具有Seq ID No.7所示序列的环引物FLOOP和具有Seq ID No.8所示序列的环引物BLOOP，Seq ID No.1：5’‑‑‑TGGKTGTTTYGARTTCTAYCACAA‑‑‑3’Seq ID No.2：5’‑‑‑AGAAACAAGGGTGTTTTTAAYTAYAATCTG‑‑‑3’Seq ID No.3：5’‑‑‑TATTTCCTCYCTGTTTAGYCTTGMTTCT‑‑‑3’Seq ID No.4：5’‑‑‑GTGACAATGAATGYATGGAAAGTGT‑‑‑3’Seq ID No.5：5’‑‑‑GTGGCGAGTTCCCTAGCACTGG‑‑‑3’Seq ID No.6：5’‑‑‑CTCACAAWTYTAGATGCAAATTCTGC‑‑‑3’Seq ID No.7：5’‑‑‑TCTGARTAYTGYGGATAGTCATACGTTCC‑‑‑3’Seq ID No.8：5’‑‑‑GGTAGCTGGTCTRTCTTTTTGGATGTG‑‑‑3’。