Bt杀虫蛋白Cry1Ac-a的表达体系

摘要：

本发明属于分子生物学和生物技术领域，具体为一种人工合成的Bt杀虫蛋白Cry1Ac-a的表达体系。该表达体系包括表达载体和Cry1Ac-a蛋白基因片段，所述基因片段根据大肠杆菌密码子偏爱性进行优化而获得，优化后的Cry1Ac-a蛋白由615个氨基酸组成，分子量为68.7KD，等电点为5.42。本发明还包括利用重组菌株经IPTG诱导获得蛋白高效表达的方法。本发明克服了大肠杆菌表达密码子偏好的缺点，显著降低了mRNA的二级结构，使得该蛋白在大肠杆菌中高表达，为高效、低成本获得Cry1Ac-a蛋白提供了切实可行的解决方案。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210057572.4

申请日期：2012-03-07

公开/公告号：CN102586286A

公开/公告日：2012-07-18

主分类号：C12N15/32(2006.01)I

申请/专利权人:复旦大学

发明/设计人:宋志平;覃晓萍;肖满秋;冯延叶;杨忠

主申请人地址:200433 上海市杨浦区邯郸路220号

专利代理机构:上海正旦专利代理有限公司 31200

代理人:陆飞%盛志范

国别省市代码:上海;31

权利要求：

人工合成的Bt杀虫蛋白的基因，其特征在于是对Cry1Ac编码框和编码序列进行改造和优化而获得，即对Cry1Ac蛋白编码框优化后再进行大肠杆菌密码子偏好优化，并在5’端和3’端分别引入与表达载体一致的NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点，氨基酸序列末端加入终止密码子TAA而获得；其氨基酸序列为SEQ.ID.?No.1?所示，记为Cry1Ac?a?；编码表达的杀虫蛋白氨基酸序列为SEQ.ID.?No.2所示。