Fc结合性蛋白质及其制造方法
本发明提供与野生型相比对热、酸和/或碱的稳定性提高的Fc结合性蛋白质及其制造方法，此外，还提供将该蛋白质用作亲和色谱用配体，特异性地分离包含Fc结合性蛋白质结合位点的蛋白质的方法。解决方法：通过将野生型人Fc受体的处于细胞外区域的1个以上的特定氨基酸残基取代成其他氨基酸残基，能够得到与野生型人Fc受体相比、对热、酸和/或碱的稳定性提高的Fc结合性蛋白质。本发明的Fc结合性蛋白质通过例如固定化于固相，作为亲和色谱用配体是有用的。此外，使用用包含编码本发明的Fc结合性蛋白质的多核苷酸的表达载体转化的宿主，表达该蛋白质，则与使用野生型人Fc受体的情况相比，蛋白质的生产量提高。
发明专利
CN201180023599.5
2011-03-10
CN103038344A
2013-04-10
C12N15/09(2006.01)I
公益财团法人相模中央化学研究所%东曹株式会社
畑山耕太;朝冈义晴;田中亨;井出辉彦
日本神奈川县
北京市柳沈律师事务所 11105
沈雪
日本;JP
一种Fc结合性蛋白质，其包含SEQ??ID??NO：1所示的氨基酸序列中的第16位至第289位的氨基酸序列，且该第16位至第289位的氨基酸序列中发生了以下(1)~(168)中的至少1个氨基酸取代：(1)SEQ??ID??NO：1的第20位的苏氨酸被取代成脯氨酸(2)SEQ??ID??NO：1的第25位的苏氨酸被取代成赖氨酸(3)SEQ??ID??NO：1的第38位的苏氨酸被取代成丙氨酸或丝氨酸(4)SEQ??ID??NO：1的第46位的亮氨酸被取代成精氨酸或脯氨酸(5)SEQ??ID??NO：1的第62位的丙氨酸被取代成缬氨酸(6)SEQ??ID??NO：1的第63位的苏氨酸被取代成异亮氨酸(7)SEQ??ID??NO：1的第69位的丝氨酸被取代成苯丙氨酸或苏氨酸(8)SEQ??ID??NO：1的第71位的精氨酸被取代成组氨酸(9)SEQ??ID??NO：1的第77位的缬氨酸被取代成丙氨酸或谷氨酸(10)SEQ??ID??NO：1的第78位的天冬酰胺被取代成天冬氨酸(11)SEQ??ID??NO：1的第94位的天冬氨酸被取代成谷氨酸(12)SEQ??ID??NO：1的第100位的异亮氨酸被取代成缬氨酸(13)SEQ??ID??NO：1的第110位的丝氨酸被取代成天冬酰胺(14)SEQ??ID??NO：1的第114位的苯丙氨酸被取代成亮氨酸(15)SEQ??ID??NO：1的第125位的组氨酸被取代成精氨酸(16)SEQ??ID??NO：1的第131位的亮氨酸被取代成精氨酸或脯氨酸(17)SEQ??ID??NO：1的第149位的色氨酸被取代成亮氨酸(18)SEQ??ID??NO：1的第156位的亮氨酸被取代成脯氨酸(19)SEQ??ID??NO：1的第160位的异亮氨酸被取代成甲硫氨酸(20)SEQ??ID??NO：1的第163位的天冬酰胺被取代成丝氨酸(21)SEQ??ID??NO：1的第195位的天冬酰胺被取代成苏氨酸(22)SEQ??ID??NO：1的第199位的苏氨酸被取代成丝氨酸(23)SEQ??ID??NO：1的第206位的天冬酰胺被取代成赖氨酸、丝氨酸或苏氨酸(24)SEQ??ID??NO：1的第207位的亮氨酸被取代成脯氨酸(25)SEQ??ID??NO：1的第218位的亮氨酸被取代成缬氨酸(26)SEQ??ID??NO：1的第240位的天冬酰胺被取代成天冬氨酸(27)SEQ??ID??NO：1的第248位的亮氨酸被取代成丝氨酸(28)SEQ??ID??NO：1的第283位的亮氨酸被取代成组氨酸(29)SEQ??ID??NO：1的第285位的亮氨酸被取代成谷氨酰胺(30)SEQ??ID??NO：1的第17位的缬氨酸被取代成甘氨酸或谷氨酸(31)SEQ??ID??NO：1的第19位的苏氨酸为异亮氨酸(32)SEQ??ID??NO：1的第20位的苏氨酸为异亮氨酸(33)SEQ??ID??NO：1的第25位的苏氨酸为甲硫氨酸或精氨酸(34)SEQ??ID??NO：1的第27位的谷氨酰胺被取代成脯氨酸或赖氨酸(35)SEQ??ID??NO：1的第35位的谷氨酰胺被取代成亮氨酸、甲硫氨酸或精氨酸(36)SEQ??ID??NO：1的第36位的谷氨酸被取代成甘氨酸(37)SEQ??ID??NO：1的第41位的亮氨酸被取代成甲硫氨酸(38)SEQ??ID??NO：1的第42位的组氨酸被取代成亮氨酸(39)SEQ??ID??NO：1的第44位的谷氨酸被取代成天冬氨酸(40)SEQ??ID??NO：1的第45位的缬氨酸被取代成丙氨酸(41)SEQ??ID??NO：1的第46位的亮氨酸被取代成丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸或色氨酸(42)SEQ??ID??NO：1的第47位的组氨酸被取代成谷氨酰胺、亮氨酸或天冬酰胺(43)SEQ??ID??NO：1的第49位的脯氨酸被取代成丝氨酸或丙氨酸(44)SEQ??ID??NO：1的第50位的甘氨酸被取代成精氨酸或谷氨酸(45)SEQ??ID??NO：1的第51位的丝氨酸被取代成丙氨酸、苏氨酸、亮氨酸、脯氨酸或缬氨酸(46)SEQ??ID??NO：1的第52位的丝氨酸被取代成甘氨酸(47)SEQ??ID??NO：1的第53位的丝氨酸被取代成亮氨酸、苏氨酸或脯氨酸(48)SEQ??ID??NO：1的第55位的谷氨酰胺被取代成精氨酸(49)SEQ??ID??NO：1的第57位的苯丙氨酸被取代成酪氨酸(50)SEQ??ID??NO：1的第58位的亮氨酸被取代成精氨酸(51)SEQ??ID??NO：1的第60位的甘氨酸被取代成天冬氨酸(52)SEQ??ID??NO：1的第61位的苏氨酸被取代成丙氨酸或丝氨酸(53)SEQ??ID??NO：1的第62位的丙氨酸被取代成谷氨酸(54)SEQ??ID??NO：1的第63位的苏氨酸被取代成亮氨酸、苯丙氨酸(55)SEQ??ID??NO：1的第64位的谷氨酰胺被取代成脯氨酸、组氨酸、亮氨酸、赖氨酸(56)SEQ??ID??NO：1的第65位的苏氨酸被取代成丙氨酸或缬氨酸(57)SEQ??ID??NO：1的第66位的丝氨酸被取代成苏氨酸(58)SEQ??ID??NO：1的第67位的苏氨酸被取代成丙氨酸或丝氨酸(59)SEQ??ID??NO：1的第69位的丝氨酸被取代成丙氨酸(60)SEQ??ID??NO：1的第70位的酪氨酸被取代成组氨酸或苯丙氨酸(61)SEQ??ID??NO：1的第71位的精氨酸被取代成酪氨酸(62)SEQ??ID??NO：1的第73位的苏氨酸被取代成丙氨酸或丝氨酸(63)SEQ??ID??NO：1的第74位的丝氨酸被取代成苯丙氨酸(64)SEQ??ID??NO：1的第76位的丝氨酸被取代成天冬酰胺(65)SEQ??ID??NO：1的第77位的缬氨酸被取代成天冬氨酸或赖氨酸(66)SEQ??ID??NO：1的第78位的天冬酰胺被取代成丝氨酸或甘氨酸(67)SEQ??ID??NO：1的第80位的丝氨酸被取代成丙氨酸(68)SEQ??ID??NO：1的第84位的精氨酸被取代成丝氨酸(69)SEQ??ID??NO：1的第88位的甘氨酸被取代成丝氨酸(70)SEQ??ID??NO：1的第89位的亮氨酸被取代成谷氨酰胺或脯氨酸(71)SEQ??ID??NO：1的第90位的丝氨酸被取代成甘氨酸(72)SEQ??ID??NO：1的第92位的精氨酸被取代成半胱氨酸或亮氨酸(73)SEQ??ID??NO：1的第96位的异亮氨酸被取代成缬氨酸或赖氨酸(74)SEQ??ID??NO：1的第97位的谷氨酰胺被取代成亮氨酸或赖氨酸(75)SEQ??ID??NO：1的第101位的组氨酸被取代成亮氨酸(76)SEQ??ID??NO：1的第102位的精氨酸被取代成丝氨酸或亮氨酸(77)SEQ??ID??NO：1的第103位的甘氨酸被取代成天冬氨酸或丝氨酸(78)SEQ??ID??NO：1的第111位的丝氨酸被取代成丙氨酸(79)SEQ??ID??NO：1的第114位的苯丙氨酸被取代成丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苏氨酸或缬氨酸(80)SEQ??ID??NO：1的第115位的苏氨酸被取代成异亮氨酸或苯丙氨酸(81)SEQ??ID??NO：1的第118位的谷氨酸被取代成天冬氨酸(82)SEQ??ID??NO：1的第121位的丙氨酸被取代成苏氨酸或缬氨酸(83)SEQ??ID??NO：1的第128位的赖氨酸被取代成精氨酸或甘氨酸(84)SEQ??ID??NO：1的第129位的天冬氨酸被取代成甘氨酸(85)SEQ??ID??NO：1的第131位的亮氨酸被取代成谷氨酰胺(86)SEQ??ID??NO：1的第133位的酪氨酸被取代成组氨酸或精氨酸(87)SEQ??ID??NO：1的第134位的天冬酰胺被取代成丝氨酸(88)SEQ??ID??NO：1的第137位的酪氨酸被取代成苯丙氨酸(89)SEQ??ID??NO：1的第138位的酪氨酸被取代成组氨酸(90)SEQ??ID??NO：1的第139位的精氨酸被取代成组氨酸(91)SEQ??ID??NO：1的第140位的天冬酰胺被取代成天冬氨酸(92)SEQ??ID??NO：1的第141位的甘氨酸被取代成天冬氨酸或缬氨酸(93)SEQ??ID??NO：1的第142位的赖氨酸被取代成谷氨酸或精氨酸(94)SEQ??ID??NO：1的第144位的苯丙氨酸被取代成异亮氨酸(95)SEQ??ID??NO：1的第147位的苯丙氨酸被取代成丝氨酸(96)SEQ??ID??NO：1的第148位的组氨酸被取代成精氨酸或谷氨酰胺(97)SEQ??ID??NO：1的第149位的色氨酸被取代成精氨酸(98)SEQ??ID??NO：1的第151位的丝氨酸被取代成苏氨酸(99)SEQ??ID??NO：1的第152位的天冬酰胺被取代成苏氨酸、异亮氨酸或脯氨酸(100)SEQ??ID??NO：1的第154位的苏氨酸被取代成丝氨酸(101)SEQ??ID??NO：1的第156位的亮氨酸被取代成组氨酸(102)SEQ??ID??NO：1的第157位的赖氨酸被取代成精氨酸(103)SEQ??ID??NO：1的第159位的天冬酰胺被取代成苏氨酸或天冬氨酸(104)SEQ??ID??NO：1的第160位的异亮氨酸被取代成苏氨酸、缬氨酸或亮氨酸(105)SEQ??ID??NO：1的第161位的丝氨酸被取代成苏氨酸(106)SEQ??ID??NO：1的第165位的苏氨酸被取代成甲硫氨酸(107)SEQ??ID??NO：1的第171位的甲硫氨酸被取代成苏氨酸(108)SEQ??ID??NO：1的第173位的赖氨酸被取代成精氨酸(109)SEQ??ID??NO：1的第174位的组氨酸被取代成谷氨酰胺(110)SEQ??ID??NO：1的第177位的苏氨酸被取代成丝氨酸(111)SEQ??ID??NO：1的第181位的异亮氨酸被取代成苏氨酸(112)SEQ??ID??NO：1的第182位的丝氨酸被取代成苏氨酸、亮氨酸、缬氨酸或谷氨酸(113)SEQ??ID??NO：1的第184位的苏氨酸被取代成丝氨酸(114)SEQ??ID??NO：1的第190位的脯氨酸被取代成丝氨酸(115)SEQ??ID??NO：1的第193位的缬氨酸被取代成亮氨酸(116)SEQ??ID??NO：1的第195位的天冬酰胺被取代成丙氨酸(117)SEQ??ID??NO：1的第196位的丙氨酸被取代成丝氨酸(118)SEQ??ID??NO：1的第198位的缬氨酸被取代成甘氨酸或甲硫氨酸(119)SEQ??ID??NO：1的第199位的苏氨酸被取代成丙氨酸(120)SEQ??ID??NO：1的第200位的丝氨酸被取代成甘氨酸或精氨酸(121)SEQ??ID??NO：1的第202位的亮氨酸被取代成甲硫氨酸(122)SEQ??ID??NO：1的第203位的亮氨酸被取代成组氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、精氨酸、脯氨酸(123)SEQ??ID??NO：1的第204位的谷氨酸被取代成缬氨酸(124)SEQ??ID??NO：1的第207位的亮氨酸被取代成谷氨酰胺、组氨酸或精氨酸(125)SEQ??ID??NO：1的第209位的苏氨酸被取代成丙氨酸(126)SEQ??ID??NO：1的第211位的丝氨酸被取代成精氨酸或甘氨酸(127)SEQ??ID??NO：1的第213位的谷氨酸被取代成缬氨酸或异亮氨酸(128)SEQ??ID??NO：1的第215位的赖氨酸被取代成精氨酸或谷氨酸(129)SEQ??ID??NO：1的第217位的亮氨酸被取代成精氨酸或谷氨酰胺(130)SEQ??ID??NO：1的第218位的亮氨酸被取代成异亮氨酸、甲硫氨酸或赖氨酸(131)SEQ??ID??NO：1的第219位的谷氨酰胺被取代成脯氨酸或精氨酸(132)SEQ??ID??NO：1的第223位的亮氨酸被取代成精氨酸、谷氨酰胺或甲硫氨酸(133)SEQ??ID??NO：1的第224位的谷氨酰胺被取代成精氨酸(134)SEQ??ID??NO：1的第225位的亮氨酸被取代成谷氨酰胺(135)SEQ??ID??NO：1的第227位的苯丙氨酸被取代成异亮氨酸(136)SEQ??ID??NO：1的第230位的酪氨酸被取代成组氨酸或苯丙氨酸(137)SEQ??ID??NO：1的第231位的甲硫氨酸被取代成赖氨酸或精氨酸(138)SEQ??ID??NO：1的第233位的丝氨酸被取代成甘氨酸或天冬酰胺(139)SEQ??ID??NO：1的第234位的赖氨酸被取代成谷氨酸(140)SEQ??ID??NO：1的第240位的天冬酰胺被取代成甘氨酸(141)SEQ??ID??NO：1的第244位的谷氨酸被取代成缬氨酸(142)SEQ??ID??NO：1的第245位的酪氨酸被取代成组氨酸或谷氨酸(143)SEQ??ID??NO：1的第246位的谷氨酰胺被取代成精氨酸或赖氨酸(144)SEQ??ID??NO：1的第248位的亮氨酸被取代成异亮氨酸(145)SEQ??ID??NO：1的第249位的苏氨酸被取代成丙氨酸或丝氨酸(146)SEQ??ID??NO：1的第250位的丙氨酸被取代成缬氨酸(147)SEQ??ID??NO：1的第251位的精氨酸被取代成丝氨酸(148)SEQ??ID??NO：1的第252位的精氨酸被取代成组氨酸(149)SEQ??ID??NO：1的第253位的谷氨酸被取代成甘氨酸(150)SEQ??ID??NO：1的第257位的亮氨酸被取代成精氨酸或谷氨酰胺(151)SEQ??ID??NO：1的第261位的谷氨酸被取代成缬氨酸或丙氨酸(152)SEQ??ID??NO：1的第262位的丙氨酸被取代成缬氨酸(153)SEQ??ID??NO：1的第263位的丙氨酸被取代成丝氨酸(154)SEQ??ID??NO：1的第264位的苏氨酸被取代成丝氨酸(155)SEQ??ID??NO：1的第265位的谷氨酸被取代成丙氨酸或甘氨酸(156)SEQ??ID??NO：1的第268位的天冬酰胺被取代成丝氨酸、异亮氨酸或苏氨酸(157)SEQ??ID??NO：1的第270位的亮氨酸被取代成组氨酸、精氨酸或缬氨酸(158)SEQ??ID??NO：1的第271位的赖氨酸被取代成精氨酸(159)SEQ??ID??NO：1的第272位的精氨酸被取代成谷氨酰胺(160)SEQ??ID??NO：1的第277位的谷氨酸被取代成缬氨酸(161)SEQ??ID??NO：1的第279位的谷氨酰胺被取代成精氨酸或组氨酸(162)SEQ??ID??NO：1的第282位的甘氨酸被取代成天冬氨酸(163)SEQ??ID??NO：1的第283位的亮氨酸被取代成脯氨酸(164)SEQ??ID??NO：1的第285位的亮氨酸被取代成精氨酸或组氨酸(165)SEQ??ID??NO：1的第286位的脯氨酸被取代成谷氨酰胺、精氨酸或谷氨酸(166)SEQ??ID??NO：1的第287位的苏氨酸被取代成异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸或缬氨酸(167)SEQ??ID??NO：1的第288位的脯氨酸被取代成丙氨酸、丝氨酸或苏氨酸(168)SEQ??ID??NO：1的第289位的缬氨酸被取代成丙氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、亮氨酸或异亮氨酸。