H1N1、PRRSV、O-FMDV四重检测试剂盒

引用

摘要：

本发明公开了一种四重同步核酸定量检测试剂盒，属于生物技术领域。本试剂盒包括PCR反应液，其中包括DEPC处理水、Taq酶、M-MLV反转录酶、RNase抑制剂、dNTPMix、10×一步法RT-PCRBuffer、MgCl2溶液，SEQIDNo.1~13所示的针对H1N1流感病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒及O型口蹄疫病毒的引物和探针；试剂盒中还包括RNA提取液、阴性质控品、工作标准品、阳性质控品和临界阳性质控品。本发明采用实时荧光定量PCR技术定量检测甲型H1N1流感病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒及O型口蹄疫病毒病毒核酸，具有特异、灵敏、快速、操作简便的优点。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201110336914.1

申请日期：2011-10-31

公开/公告号：CN102676691A

公开/公告日：2012-09-19

主分类号：C12Q1/70(2006.01)I

申请/专利权人:武汉大学

发明/设计人:胡萌;王业富

主申请人地址:430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学

专利代理机构:武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222

代理人:薛玲

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

一种甲型H1N1流感病毒、高致病性猪繁殖与综合征病毒及O型口蹄疫病毒核酸定量检测引物和探针，包括如下的序列组：1）包括下述正向引物，反向引物和荧光探针的四组序列：?a）针对甲型H1N1流感病毒matrix基因正向引物：5'??CATGGARTGGCTAAAGAC??3'，反向引物：5'??WAGGGCATTTTGGACAAA??3'，荧光探针：5'??ccaAtcTtgTcaCctct??3'，下标为LNA修饰；b）针对甲型H1N1流感病毒haemagglutinin基因正向引物：5'??TGCTGGATCTGGTATTATC??3'，反向引物：5'??ATCGGATGTATATTCTGAAATG??3'，荧光探针：5'??tcaGatAcaCcaGtccac??3'?，下标为LNA修饰；c）针对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因正向引物：5'??CTTYCTTCTGGACACTAAG??3'，反向引物：5'??CTCTGGTTAWAGGGGTTG?3'，荧光探针：5'??aacCrtCaaGcaCaactc??3'?，下标为LNA修饰；d）针对O型口蹄疫病毒VP1基因正向引物：5'??GTGACCTTCAAGTGTTRG??3'，反向引物：5'?GGCCCTCTTCATGCGGTA??3'，5’??GGCTCTCTTCATTCTGTA???3'荧光探针：5'??ctgCctAccTccTtcaac??3'?，下标为LNA修饰；2）上述1）中序列的5’端和/或3’端有延长的核苷酸片段的一组序列；3）与上述1）或2）中序列的同源性大于85%，且具有特异性的一组序列；4）与上述1）或2）或3）中序列的碱基互补的一组序列；5）上述1）、2）和3）中任何三个或多个序列形成的具有正向引物、反向引物以及与之向对应的荧光探针的分别对应上述a）~d）中所述基因的四组序列；其中，所述4种探针分别使用四种激发不同荧光信号的荧光基团；所述序列中,?Y为C或T，R为A或G，W为A或T。

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