pCDH1-MCS1-EF1-copGFP-HCN4质粒的构建方法

摘要：

本发明公开了一种pCDH1-MCS1-EF1-copGFP-HCN4质粒的构建方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：（1）从心肌组织中提取总RNA，将提取的总RNA反转录合成cDNA第一链，以反转录得到的cDNA为模板，使用含有核苷酸序列为SEQNo：2和为SEQNo：3的基因特异性引物通过PCR扩增得到HCN4起搏基因；（2）抽提pCDH1-MCS1-EF1-copGFP质粒，分别对空质粒载体pCDH1-MCS1-EF1-copGFP和步骤（1）PCR扩增得到的HCN4起搏基因用EcoRⅠ和BamHⅠ进行双酶切；（3）将双酶切后的空质粒载体pCDH1-MCS1-EF1-copGFP和双酶切后的HCN4起搏基因进行连接反应，将HCN4起搏基因连接入pCDH1-MCS1-EF1-copGFP质粒中，构建形成pCDH1-MCS1-EF1-copGFP-HCN4质粒。该质粒可以作为生物起搏的研究基础。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201110283350.X

申请日期：2011-09-22

公开/公告号：CN102399818A

公开/公告日：2012-04-04

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

申请/专利权人:苏州大学附属第一医院

发明/设计人:周亚峰;杨向军;李红霞;韩莲花;蒋文平

主申请人地址:215006 江苏省苏州市沧浪区十梓街188号

专利代理机构:苏州创元专利商标事务所有限公司 32103

代理人:范晴

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

一种pCDH1?MCS1?EF1?copGFP?HCN4质粒的构建方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：（1）从心肌组织中提取总RNA，将提取的总RNA反转录合成cDNA第一链，以反转录得到的cDNA为模板，使用含有核苷酸序列为SEQ?No：2和为SEQ?No：3的基因特异性引物通过PCR扩增得到HCN4起搏基因；（2）抽提pCDH1?MCS1?EF1?copGFP质粒，分别对空质粒载体pCDH1?MCS1?EF1?copGFP和步骤（1）PCR扩增得到的HCN4起搏基因用EcoRⅠ和BamHⅠ进行双酶切：（3）将双酶切后的空质粒载体pCDH1?MCS1?EF1?copGFP和双酶切后的HCN4起搏基因进行连接反应，将HCN4起搏基因连接入pCDH1?MCS1?EF1?copGFP质粒中，构建形成pCDH1?MCS1?EF1?copGFP?HCN4质粒。