FXYD6胞内区蛋白的表达和纯化方法
本发明公开了一种FXYD6胞内区蛋白的表达和纯化的方法,是采用核苷酸序列如SEQ ID No:2和SEQ ID No:3所示的引物对、利用PCR技术扩增FXYD6胞内区序列后,将扩增出的FXYD6胞内区序列插入到表达载体pGEX-6P-1中,构建重组载体pGEX-6P-1-FXYD6胞内区;再将重组载体转化于宿主细胞中,并在宿主细胞中表达FXYD6胞内区重组蛋白;表达的重组蛋白进行鉴定后,通过亲和层析柱进行纯化,经过纯化的蛋白再通过SDS-PAGE分析鉴定纯度。本发明提供了FXYD6胞内区的纯化蛋白,进一步可应用于制备FXYD6蛋白胞内区的单克隆抗体。为进一步研究FXYD6组织分布提供了有利工具。
发明专利
CN201110259079.6
2011-09-02
CN102978210A
2013-03-20
C12N15/12(2006.01)I
周宁新
周宁新
100088 北京市西城区新街口外大街16号
北京北新智诚知识产权代理有限公司 11100
王淳
北京;11
一种FXYD6胞内区蛋白的表达和纯化的方法,其特征在于,步骤如下:a.采用核苷酸序列如SEQ ID No:2和SEQ ID No:3所示的引物对,利用PCR技术扩增FXYD6胞内区基因;b.将扩增出的FXYD6胞内区基因插入到已用BamH I和Xho I双酶切后的表达载体pGEX‑6P‑1中,构建重组载体pGEX‑6P‑1‑FXYD6胞内区;c.将重组载体pGEX‑6P‑1‑FXYD6胞内区转化于宿主细胞中,并在宿主细胞中表达FXYD6胞内区蛋白;d.表达的FXYD6胞内区蛋白采用蛋白质免疫印记进行鉴定,之后通过亲和层析柱进行纯化,经过纯化的蛋白再通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定纯度。