cDNA-AFLP法分离苏太猪肌内脂肪含量差异表达基因的方法

摘要：

本发明公开了cDNA-AFLP法分离苏太猪肌内脂肪含量差异表达基因的方法。苏太商品猪屠宰后采取背最长肌，根据肌内脂肪的含量从中选取最高和最低各5头以上构建RNA池，提取肌内脂肪部位的总RNA，以总RNA为模板合成双链cDNA，用识别序列分别为6bp和4bp的两种限制性内切酶酶切双链cDNA，酶切片段两端与相应的限制性内切酶人工接头序列连接后，利用与所述的限制性内切酶人工接头序列互补的预扩增引物进行预扩增，再以预扩增产物为模板进行选择性扩增，选择性扩增产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，获得脂肪含量差异表达基因的差异片段，回收差异片段，进行克隆及测序，从而获得苏太猪肌内脂肪含量差异表达基因。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201110197190.7

申请日期：2011-07-14

公开/公告号：CN102286466A

公开/公告日：2011-12-21

主分类号：C12N15/10(2006.01)I

申请/专利权人:南京农业大学

发明/设计人:徐银学;李纪委;张子敬;张宝乐

主申请人地址:210095 江苏省南京市玄武区卫岗1号

专利代理机构:南京天华专利代理有限责任公司 32218

代理人:徐冬涛%高原

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

利用cDNA?AFLP法分离苏太猪肌内脂肪含量差异表达基因的方法，其特征在于苏太商品猪屠宰后采取背最长肌，根据肌内脂肪的含量从中选取最高和最低各5头以上构建RNA池，提取肌内脂肪部位的总RNA，以总RNA为模板合成双链cDNA，用识别序列分别为6bp和4bp的两种限制性内切酶酶切双链cDNA，酶切片段两端与相应的限制性内切酶人工接头序列连接后，利用与所述的限制性内切酶人工接头序列互补的预扩增引物进行预扩增，再以预扩增产物为模板进行选择性扩增，选择性扩增产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，获得脂肪含量差异表达基因的差异片段。