piggyBac转座子介导生产体内合成半胱氨酸转基因山羊的载体构建方法及其应用

摘要：

本发明公开了一种能用于生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：①合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5′端和PB3′端碱基序列，合成时在PB5′端和PB3′端中间预留出多克隆位点，然后将该序列克隆到pBluSKm载体中构建成pBluSKm-PB载体；再将Neomycin抗性基因和绿色荧光蛋白基因克隆到pBluSKm-PB载体中最终构建成pBluSKm-PB-NEO-EGFP转座子载体。本发明所获得的转座子载体能够满足细胞筛选、倒置荧光显微镜下显微操作和生产转基因羊等要求。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201110041480.2

申请日期：2011-02-21

公开/公告号：CN102181466A

公开/公告日：2011-09-14

主分类号：C12N15/66(2006.01)I

申请/专利权人:西北农林科技大学

发明/设计人:陈玉林;白丁平;方堃;杨明明;何晓琳

主申请人地址:712100 陕西省杨凌示范区西农路22号西西北农林科技大学动科院11#

国别省市代码:陕西;61

权利要求：

一种生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：合成一段PB碱基序列，将该序列克隆到pBluSKm载体中构建成pBluSKm?PB载体；再将Neomycin抗性基因和绿色荧光蛋白基因克隆到pBluSKm?PB载体中，最终构建成pBluSKm?PB?NEO?EGFP转座子载体，所述的PB碱基序列为：CCCCCCGGTACCCCCTAGAAAGATAGTCTGCGTAAAATTGACGCATGCATTCTTGAAATATTGCTCTCTCTTTCTAAATAGCGCGAATCCGTCGCTGTGCATTTAGGACATCTCAGTCGCCGCTTGGAGCTCCCGTGAGGCGTGCTTGTCAATGCGGTAAGTGTCACTGATTTTGAACTATAACGACCGCGTGAGTCAAAATGACGCATGATTATCTTTTACGTGACTTTTAAGATTTAACTCATACGATAATTATATTGTTATTTCATGTTCTACTTACGTGATAACTTATTATATATATATTTTCTTGTTATAGATATCGTCGACCCCCCCCATCGATCCCCCCCCCACGCGTTAAAAGTTTTGTTACTTTATAGAAGAAATTTTGAGTTTTTGTTTTTTTTTAATAAATAAATAAACATAAATAAATTGTTTGTTGAATTTATTATTAGTATGTAAGTGTAAATATAATAAAACTTAATATCTATTCAAATTAATAAATAAACCTCGATATACAGACCGATAAAACACATGCGTCAATTTTACGCATGATTATCTTTAACGTACGTCACAATATGATTATCTTTCTAGGGCCGCGGCCCCCCC。