pET15b-PEP-1-VP3质粒及构建、PEP-1-VP3融合蛋白及表达

摘要：

本发明提出了pET15b-PEP-1-VP3质粒及构建、PEP-1-VP3融合蛋白及表达。具体如下：以PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒为模板，设计合成上下游引物进行PCR扩增，扩增条件：起始变性95℃1min，然后执行如下反应条件：95℃30s，68℃3min，35个循环，最后68℃延伸3min。PCR产物经低熔点琼脂糖凝胶电泳后鉴定，回收并纯化366bp的VP3cDNA片段；因表达的PEP-1-VP3融合蛋白主要以包涵体形式存在，将收集的菌体溶于50ml缓冲液A中，400W、10min、间隔5min，4℃超声破菌破包涵体41min。破菌完全的菌液较清，置超速冷冻离心机中20000rpm、4℃离心10min，融合蛋白以可溶性形式存在于上清中，将上清液缓慢加入Ni2+-氮基三乙酸琼脂糖亲和层析柱，上样完毕后，杂交结合3小时。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201110030897.9

申请日期：2011-01-28

公开/公告号：CN102618567A

公开/公告日：2012-08-01

主分类号：C12N15/70(2006.01)I

申请/专利权人:石小燕

发明/设计人:石小燕;邓守恒;陈萍

主申请人地址:430014 武汉市江岸区胜利街26号

专利代理机构:十堰博迪专利事务所 42110

代理人:高良军

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

pET15b?PEP?1?VP3质粒，其中以图1所示的pET15b为表达载体，PEP?1?VP3基因见序列表1中的核苷酸序列。