RNA指数式扩增的方法以及RNA反应器

摘要：

本发明涉及一种采用引物非依赖性RNA依赖性的RNA聚合酶(RdRp)进行RNA指数式扩增的方法，其中反应物进行预混循环，然后转移至反应室中，在该反应室进行互补链的聚合反应以及产物双链RNA的分离。本发明还涉及一种用于实现RNA指数式扩增的RNA反应器。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201080046916.0

申请日期：2010-10-21

公开/公告号：CN102597264A

公开/公告日：2012-07-18

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:里博克斯艾克斯有限公司

发明/设计人:雅克·罗哈耶姆

主申请人地址:德国拉德博伊尔迈斯纳大街191号

专利代理机构:上海智信专利代理有限公司 31002

代理人:邓琪

国别省市代码:德国;DE

权利要求：

一种RNA指数式扩增的方法，包括以下步骤：(a)在混合室中将单链RNA，引物非依赖性RNA依赖性的RNA聚合酶(RdRp)，NTPs，反应缓冲液，以及，可选地，RNA合成引发寡核苷酸混合；(b)将步骤(a)中的混合物转移至反应室；(c)可选地，将所述RNA合成引发寡核苷酸退火到所述单链RNA上；(d)在所述反应室中将所述混合物在条件下温育，使得引物非依赖性RdRp从头合成出与所述单链RNA互补的RNA链，可选地，所述RdRp延伸杂交到所述单链RNA上的RNA合成引发寡核苷酸从而形成双链RNA；(e)将步骤(d)中形成的所述双链RNA分离成单链RNA；(f)在混合室中将引物非依赖性RdRp，NTPs，反应缓冲液，以及，可选地，RNA合成引发寡核苷酸混合；(g)将步骤(e)中的混合物转移至所述反应室中；(h)重复步骤(d)?(g)，或者，可选地，(c)?(g)至少5次；(i)进行最终的温育步骤(d)从而合成终产物双链RNA，以及，可选地，(j)从所述反应室回收所述终产物双链RNA。