K88大肠杆菌不同血清型的PCR特异性检测和分型鉴别方法

摘要：

本发明涉及K88大肠杆菌不同血清型的检测方法。该方法是先对待测样本进行PCR特异性检测，出现750bp条带的为待测样本为K88大肠杆菌，再分别用3对特异性引物对K88大肠杆菌DNA进行PCR扩增，根据扩增产物的500bp条带判断血清型。本发明的方法不仅分型结果准确无误，且没有假阳性和相互交叉反应的发生，还具有操作简便，可同时检测多个样品，成本较低的优点。?

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201010574869.9

申请日期：2010-12-06

公开/公告号：CN101979664A

公开/公告日：2011-02-23

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:扬州大学

发明/设计人:朱国强;郁磊;吴圣龙;包文斌;朱春红;羊扬;王建业;姚丰华;朱军;舒燕;朱晓芳

主申请人地址:225009 江苏省扬州市大学南路88号

专利代理机构:南京知识律师事务所 32207

代理人:卢亚丽

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

?一种K88大肠杆菌不同血清型的PCR特异性检测和分型鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）K88大肠杆菌PCR特异性检测：以SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2的序列为引物，对待测样本DNA模板进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，出现750bp?条带的为待测样本为K88大肠杆菌；（2）分型鉴别：以步骤1确定为K88大肠杆菌的待测样本的DNA为模板，分别用下述3对引物进行PCR扩增：第1对：上游引物序列如SEQ?ID?NO：1，下游引物序列如SEQ?ID?NO：3；第2对：上游引物序列如SEQ?ID?NO：1，下游引物序列如SEQ?ID?NO：4；第3对：上游引物序列如SEQ?ID?NO：1，下游引物序列如SEQ?ID?NO：5；扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，根据出现500bp?条带所对应的引物来判断待测样本血清型：由第1对引物扩增出500bp?条带的，待测样本血清型为K88ab；由第2对引物扩增出500bp?条带的，待测样本血清型为K88ac；由第3对引物扩增出500bp?条带的，待测样本血清型为K88ad。