L-乳酸脱氢酶基因缺失的工程菌及其构建方法与应用

摘要：

本发明涉及L-乳酸脱氢酶基因缺失的工程菌及其构建方法与应用。利用PCR扩增L-乳酸脱氢酶基因(ldh)上下游序列ldh1、ldh2，并将克隆片段连接到基因敲除载体上，将构建好的敲除载体导入到谷氨酸棒杆菌中，利用同源重组的方法将菌株中的L-乳酸脱氢酶基因(ldh)沉默后筛选获得基因工程菌C.glutamicum?Res167Δldh。本发明利用同源重组的方法使谷氨酸棒杆菌中L-乳酸脱氢酶基因沉默，从而得到产纯D-乳酸的基因工程菌。用本发明的工程菌进行乳酸发酵生产，其D-乳酸产量量达到20g/L以上，纯度为99％以上。本发明将在D-乳酸的工业化生产中发挥重要作用，具有广阔的应用前景。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201010235511.3

申请日期：2010-07-22

公开/公告号：CN102102086A

公开/公告日：2011-06-22

主分类号：C12N1/20(2006.01)I

申请/专利权人:天津大学

发明/设计人:闻建平;李爽;贾晓强

主申请人地址:300072 天津市南开区卫津路92号天津大学

专利代理机构:天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201

代理人:王丽

国别省市代码:天津;12

权利要求：

L?乳酸脱氢酶基因缺失的工程菌，其特征在于所述基因工程菌为谷氨酸棒杆菌Res167Δldh(Corynebacterium?glutamicum?Res167Δldh)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC?No.3973。