DGGE技术在检测浮游植物群落结构中的使用方法
本发明公开了一种DGGE技术在检测浮游植物群落结构中的使用方法，其中，包括以下步骤：将浮游植物水样首先用200目的筛绢过滤，然后将过滤后的海水用0.45μm孔径的硝酸纤维素膜过滤，将滤膜转移至2mlEppendorf管中，置于-20℃，用于浮游植物群落多样性的分析；收集和洗涤藻细胞进行DNA的提取，进行PCR及琼脂糖电泳检测，使用DGGE进行浮游植物群落结构分析，最后进行图形处理和数据分析。本发明可精确检测浮游植物群落的结构组成，有利于浮游植物赤潮的爆发预警。
发明专利
CN201010184810.9
2010-05-28
CN101892310A
2010-11-24
C12Q1/68(2006.01)I
中国海洋大学
甄毓;孙静;米铁柱;于志刚
266100 山东省青岛市崂山区松岭路238号
北京思海天达知识产权代理有限公司 11203
吴荫芳
山东;37
一种DGGE技术在检测浮游植物群落结构中的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：将浮游植物水样首先用200目的筛绢过滤，然后将过滤后的海水用0.45μm孔径的硝酸纤维素膜过滤，将滤膜转移至2ml?Eppendorf管中，置于?20℃，用于浮游植物群落多样性的分析；收集和洗涤藻细胞：在收集的藻细胞中中加入750μl?TE缓冲液洗涤藻细胞，10000rpm?4℃离心10分钟，小心弃上清；加入250μl?TE缓冲液悬浮藻细胞；裂解藻细胞：加入500μl预热55℃的抽提缓冲液，混和均匀，放入55℃水浴中一小时，直到藻液呈透明状；放进4℃冰箱冷却3分钟；抽提：加入1ml氯仿∶异戊醇(24∶1)，轻柔颠倒，使之呈乳浊液；14000rpm?4℃离心10分钟，小心用微量吸头取出上清液(约600μl)至eppendorf管中，重复抽提一次；沉淀：加二倍体积的冰冷的无水乙醇和1/10体积的NaAc，混匀，放入?80℃冰箱30分钟；14000rpm?4℃离心10分钟，小心弃上清；洗涤：DNA沉淀用预冷的70％酒精洗两次；溶解：自然风干，溶于20?40μl?TE缓冲液中，置于?20℃待用。