5’-RACE接头序列添加方法及接头序列和5’端未知基因完整编码序列的扩增方法

摘要：

5’-RACE接头序列添加方法及接头序列和5’端未知基因完整编码序列的扩增方法，它涉及一种接头序列添加方法及接头序列和基因完整编码序列的扩增方法。它解决现有接头序列添加方法存在的对mRNA?5’末端信息的完整性没有选择性及模板复杂度高等缺陷。5’-RACE接头序列添加：一、根据目的基因与目的物种设计特异性逆转录引物和接头序列；二、逆转录添加接头序列。接头序列如SEQ?ID?NO：10所示。5’端未知基因完整编码序列扩增：一、设计引物；二、逆转录并添加接头；三、巢式PCR扩增；四、测序，分析。本发明5’-RACE接头序列添加方法具有对mRNA?5’末端信息的完整性有选择性及基因克隆效率高等优点。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201010184510.0

申请日期：2010-05-27

公开/公告号：CN101864413A

公开/公告日：2010-10-20

主分类号：C12N15/10(2006.01)I

申请/专利权人:东北农业大学

发明/设计人:朱延明;柏锡;李勇;王希;纪巍;才华

主申请人地址:150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区木材街59号

专利代理机构:哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109

代理人:何强

国别省市代码:黑龙江;23

权利要求：

5’-RACE接头序列添加方法，其特征在于5’-RACE接头序列按以下步骤添加：一、根据目的基因设计目的基因特异性逆转录引物，根据目的基因所在物种基因组特征设计接头序列，接头序列的3’末端设计有至少3个连续的鸟嘌呤；二、在逆转录体系中加入接头和目的基因特异性逆转录引物，然后用有末端转移酶活性的逆转录酶进行逆转录，实现了5’-RACE接头序列添加。