一个定向突变及遗传改造的重组质粒及其应用

摘要：

本发明提供一个用于耐辐射球菌目的基因定向突变和染色体遗传改造的重组基因，具有SEQ?ID?№：1的核苷酸序列，是表达耐辐射球菌热激蛋白GroEL基因的启动子PgroEL与卡那霉素抗性基因KanR的融合DNA片段。本发明的基因片段位于质粒pRADK，该质粒可以在耐辐射球菌中正常复制并遗传，而且在大肠杆菌中也有较高的拷贝数，因而可以有较高产量，很容易得到大量质粒，进而可以从该质粒到得到SEQ?ID?№：1的序列，可在构建耐辐射球菌以及耐辐射球菌属其它菌株的目的基因突变株的筛选标记中应用；也可在构建耐辐射球菌以及耐辐射球菌属其它菌株遗传改造成工程菌的筛选标记中应用。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201010101163.0

申请日期：2010-01-22

公开/公告号：CN101768598A

公开/公告日：2010-07-07

主分类号：C12N15/63(2006.01)I

申请/专利权人:浙江大学

发明/设计人:华跃进;陆辉明;高冠军;黄丽芬

主申请人地址:310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号

专利代理机构:杭州求是专利事务所有限公司 33200

代理人:张法高%赵杭丽

国别省市代码:浙江;33

权利要求：

一个定向突变及遗传改造的重组质粒，其特征在于，具有SEQ?ID?No：1的核苷酸序列，是表达耐辐射球菌热激蛋白GroEL基因的启动子PgroEL与卡那霉素抗性基因KanR的融合DNA片段，通过以下步骤获得：构建PgroEL启动子与卡那霉素结构基因的紧密融合，并在接合位点作了变动，PgroEL启动子核糖体结合位点(RBS)后的CACATG替换成CATATG(即NdeI酶切位点)，该酶切位点的后三个碱基ATG作为卡那霉素抗性基因起始翻译位点。