IRES介导的GH四种亚型与IGF-I双顺反子真核共表达载体的构建与应用

摘要：

本发明是IRES介导的GH四种亚型与IGF-I双顺反子真核共表达载体的构建与应用，根据GH和IGF-I的mRNA序列和蛋白序列对比得出GH四种亚型和IGF-I的编码序列设计引物，以实验室的GH和IGF-I的DNA为模板通过PCR的方法得到GH四种亚型和IGF-I的目标DNA，将PCR产物连接到pBS-T载体中，获得GH和IGF-I的TA载体，然后将TA载体经XhO?I和EcoR?I双酶切将GH四种亚型的基因定向插入pCI-IRES中，成功构建了GH四种亚型的重组质粒pCI-22-IRES、pCI-20-IRES、pCI-17-IRES和pCI-5-IRES。然后将IGF-I的TA载体经Sam?I和Not?I双酶切将IGF-I的基因分别定向插入上述重组质粒中，成功构建了IRES介导的人生长激素(GH)四种亚型与IGF-I的双顺反子真核共表达载体：pCI-22-IRES-IGF-I、pCI-20-IRES-IGF-I、pCI-17-IRES-IGF-I、pCI-5-IRES-IGF-I。为进一步研究GH的四种亚型和IGF-I基因的生物学特性和功能提供了方便有效的基本资料。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201010000731.8

申请日期：2010-01-15

公开/公告号：CN101892262A

公开/公告日：2010-11-24

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

申请/专利权人:北京科技大学

发明/设计人:杜宏武;李传宝;金海明;华甜

主申请人地址:100083 北京市海淀区学院路30号

专利代理机构:北京东方汇众知识产权代理事务所(普通合伙) 11296

代理人:刘淑芬

国别省市代码:北京;11

权利要求：

一种IRES介导的GH四种亚型与IGF?I双顺反子真核共表达载体的构建方法，所述GH四种亚型为22kD、20kD、17kD和5kD，其特征在于，所述构建方法包括步骤：1)根据Genebank公布的GH和IGF?I的mRNA序列和蛋白序列对比得出GH四种亚型和IGF?I的编码序列设计引物，以实验室的GH和IGF?I的DNA为模板通过PCR的方法得到GH四种亚型和IGF?I的目标DNA，将PCR产物连接到pBS?T载体中，获得GH四种亚型和IGF?I的TA载体；2)然后将GH的TA载体经XhO?I和EcoR?I双酶切将GH四种亚型的基因定向插入pCI?IRES中，构建了GH四种亚型的真核表达载体pCI?22?IRES、pCI?20?IRES、pCI?17?IRES和pCI?5?IRES；3)将IGF?I的TA载体经Sam?I和Not?I双酶切将IGF?I的基因分别定向插入pCI?22?IRES、pCI?20?IRES、pCI?17?IRES和pCI?5?IRES，构建IRES介导的人生长激素(GH)四种亚型22kD、20kD、17kD、5kD与IGF?I的双顺反子真核共表达载体：pCI?22?IRES?IGF?I、pCI?20?IRES?IGF?I、pCI?17?IRES?IGF?I和pCI?5?IRES?IGF?I。