RNA的选择性的5′连接标记

摘要：

本发明提供了用于选择性地5′连接标记需要的RNA分子类别的新颖的组合物、试剂盒和方法，它们采用RNA?5′多磷酸酶、RNA?5′单磷酸酶、加帽酶、脱帽酶、核酸焦磷酸酶和RNA连接酶以及其它酶，所述需要的RNA分子类别的差别在于它们的5′末端上的特定化学部分。5′标记的RNA分子可以用于合成标记的第一链cDNA、双链cDNA和有义或反义RNA，它们用于多种用途。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200980125379.6

申请日期：2009-05-04

公开/公告号：CN102076851A

公开/公告日：2011-05-25

主分类号：C12N15/10(2006.01)I

申请/专利权人:EPI中心科技公司

发明/设计人:J·J·詹德里萨克;R·维迪亚纳桑;G·达尔

主申请人地址:美国威斯康星州

专利代理机构:中国专利代理(香港)有限公司 72001

代理人:李波%郭文洁

国别省市代码:美国;US

权利要求：

5′连接标记样品中具有5′多磷酸基团的未加帽的RNA的方法，所述方法包含下述步骤：(A)提供：(i)样品，其含有具有5′多磷酸基团的未加帽的RNA，包括其中所述样品另外含有具有5′单磷酸基团的RNA和/或加帽的RNA和/或具有5′羟基的RNA；(ii)RNA?5′多磷酸酶；(iii)显示标记的受体寡核苷酸；和(iv)RNA连接酶；(B)使所述样品接触RNA?5′多磷酸酶，接触的条件和时间足以使得其中具有5′多磷酸基团的未加帽的RNA被转化成具有5′单磷酸基团的RNA；和(C)使来自步骤(B)的样品接触受体寡核苷酸和RNA连接酶，接触的条件和时间足以使得其中受体寡核苷酸的3′末端被连接到具有5′单磷酸基团的RNA上，但是不连接到加帽的RNA上，并且生成5′?连接标记的RNA。