DNA甲基化测定方法

摘要：

本发明涉及对生物来源标本所含基因组DNA中的目标DNA区域中被甲基化了的DNA的含量进行测定的方法等。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200980118262.5

申请日期：2009-03-25

公开/公告号：CN102037139A

公开/公告日：2011-04-27

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:住友化学株式会社

发明/设计人:冨原祥隆;佐藤日出夫;樽井弘和

主申请人地址:日本国东京都

专利代理机构:中科专利商标代理有限责任公司 11021

代理人:朱丹

国别省市代码:日本;JP

权利要求：

一种测定方法，其是对生物来源标本所含基因组DNA中目标DNA区域中的被甲基化了的DNA含量进行测定的方法，具有以下工序：(1)第一工序，其中，对生物来源标本所含基因组DNA来源的DNA试样，进行利用甲基化敏感性限制酶的消化处理，(2)第二工序，其中，从由第一工序获得的经消化处理了的DNA试样获取含有目标DNA区域的单链DNA(正链)，使该单链DNA(正链)与单链固定化寡核苷酸碱基配对，从而选择上述单链DNA，上述单链固定化寡核苷酸具有对该单链DNA的3’末端的一部分有互补性的碱基序列，该单链DNA的3’末端的一部分不含上述目标DNA区域，(3)第三工序，其中，将由第二工序选择的单链DNA作为模板，将上述单链固定化寡核苷酸作为引物，使该引物1次延伸，从而使上述单链DNA延伸形成双链DNA，以及，(4)第四工序，其中，作为下述各本步骤的前步骤，具有将由第三工序获得的延伸形成的双链DNA暂时分离成单链状态的步骤(前步骤)，并且，作为本步骤，具有第A步骤(本步骤)和第B步骤(本步骤)，(a)第A步骤，其具有：通过使生成的为单链状态的DNA(正链)与上述单链固定化寡核苷酸(负链)碱基配对，从而选择上述为单链状态的DNA的第A1步骤；和将在第A1步骤选择的为单链状态的DNA为模板，将上述单链固定化寡核苷酸作为引物，通过使该引物1次延伸，从而使上述为单链状态的DNA延伸形成双链DNA的第A2步骤，(b)第B步骤，其中，将生成的为单链状态的DNA(负链)作为模板，将具有下述碱基序列(正链)的引物(反向引物)作为延伸引物，使该延伸引物1次延伸，从而使上述为单链状态的DNA延伸形成双链DNA，所述碱基序列(正链)是对上述为单链状态的DNA(负链)所具有的碱基序列的部分碱基序列(负链)具有互补性的碱基序列(正链)，上述为单链状态的DNA(负链)所具有的碱基序列的部分碱基序列(负链)与对上述目标DNA区域的碱基序列(正链)有互补性的碱基序列(负链)的3’末端相比更靠近3’末端侧，进而，将由上述各本步骤获得的延伸形成了的双链DNA暂时分离成单链状态后，进行反复操作，从而将上述目标DNA区域中的被甲基化了的DNA扩增到可以检测的量，将扩增了的DNA的量定量。