PCR反应中的非竞争性内对照系统

摘要：

本发明涉及聚合酶链反应体系中内对照分子的定量方法和内对照分子的构建方法、以及基于其得到的量和/或内对照分子的核酸扩增方法和相应检测试剂盒。另外，本发明还涉及二步法PCR扩增方法和内对照分子或试剂盒的应用等。上述方法用以提高检测灵敏度和/或兼顾检测灵敏度和表征假阴性结果的可靠性，并可以灵活适应PCR扩增体系和检测方式的改变。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200910119254.4

申请日期：2009-03-10

公开/公告号：CN101492744

公开/公告日：2009-07-29

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:上海浩源生物科技有限公司

发明/设计人:李丙亮;杨国翠;张文艳;李振勇;黄道培

主申请人地址:201703上海市青浦区沪青平公路2933弄2幢

专利代理机构:北京万科园知识产权代理有限责任公司

代理人:张亚军%曹诗健

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1、一种PCR定性检测样品中靶核酸的方法中所用的内对照分子的优化量的确定方法，其包括如下步骤：(1)以相同的扩增条件，分别进行k个相同的阴性PCR扩增，所述阴性PCR扩增体系中内对照分子的加入量为No，k≥10；该阴性PCR扩增体系包含靶核酸引物对、内对照分子和内对照引物对，其中不存在靶核酸；(2)分别检测步骤(1)的阴性PCR扩增后是否扩增出内对照分子，未检测到内对照分子扩增的阴性PCR扩增的个数为t；若t＝0或者t＝k，则调整No，重新从步骤(1)开始进行；若t＝0，提高内对照分子的量；若t＝k，降低内对照分子的量；(3)根据公式(I)计算临界量Nc