SGAE标签3’端cDNA片段的克隆方法

摘要：

一种生物技术领域的SGAE标签3’端cDNA片段的克隆方法，包括如下步骤：利用修饰的oligo(dT₁₆)反转录所有的mRMA，然后利用鼠源逆转录酶在合成的第一条cDNA的3’端添加3-5个胞嘧啶碱基，利用引物合成第一条cDNA的互补链，根据cDNA两端的已知序列合成一对引物，进行PCR扩增，富集所有的cDNA；以步骤一富集得到的cDNA为模板，采用半巢式PCR克隆含tag的特异性片段。本发明更加容易获得含有tag标签的特异性片段，过程更加简单，费用更加低廉。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200910046354.9

申请日期：2009-02-19

公开/公告号：CN101514353

公开/公告日：2009-08-26

主分类号：C12P19/34(2006.01)I

申请/专利权人:上海交通大学

发明/设计人:乔中东;徐汪节;李巧丽;王朝霞;史节平

主申请人地址:200240上海市闵行区东川路800号

专利代理机构:上海交达专利事务所

代理人:王锡麟%王桂忠

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1、一种SGAE标签3’端cDNA片段的克隆方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，利用修饰的oligo(dT16)反转录所有的mRMA，然后利用鼠源逆转录酶在合成的第一条cDNA的3’端添加3-5个胞嘧啶碱基，利用引物合成第一条cDNA的互补链，根据cDNA两端的已知序列合成一对引物，进行PCR扩增，富集所有的cDNA；步骤二，以步骤一富集得到的cDNA为模板，采用半巢式PCR克隆含tag的特异性片段。