LfcinB15-Mag12编码基因的合成及在大肠杆菌中表达的方法

摘要：

本发明提供了一种LfcinB15-Mag12编码基因的合成及在大肠杆菌中表达的方法，根据E.coli密码子偏爱性设计编码Lfcin B 1-15个氨基酸的活性基因片段和Magainin(1-12)的活性基因片段，利用表达载体pET-32a构建重组表达载体pET-32a-Lfcin B15-Mag12，在pET-32a的多克隆位点前存在编码6个组氨酸标签的密码子，同时加入终止密码子TAG、TAA。本发明利用基因工程方法在大肠杆菌中成功表达了LfcinB15-Mag12，为基因工程方法规模化生产杂合肽及其它贵重肽类奠定了理论与实践基础，对建立肽类基因工程菌和抗菌肽研究的共性技术具有重要意义。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200810209661.X

申请日期：2008-12-10

公开/公告号：CN101509007

公开/公告日：2009-08-19

主分类号：C12N15/62(2006.01)I

申请/专利权人:东北农业大学

发明/设计人:单安山;高 鹏;毕重鹏

主申请人地址:150030黑龙江省哈尔滨市香坊区公滨路木材街59号东北农业大学动物科学与技术学院

专利代理机构:哈尔滨市哈科专利事务所有限责任公司

代理人:刘 娅

国别省市代码:黑龙江;23

权利要求：

1、一种LfcinB15-Mag12编码基因的合成方法，其特征在于：根据E.coli密码子偏爱性设计编码Lfcin B1-15个氨基酸的活性基因片段和Magainin(1-12)的活性基因片段，利用表达载体pET-32a构建重组表达载体pET-32a-Lfcin B15-Mag12，在pET-32a的多克隆位点前存在编码6个组氨酸标签的密码子，在pET-32a-Lfcin B15-Mag12中，将编码Lfcin B15-Mag1227个氨基酸的基因片段克隆在编码组氨酸标签的密码子后、限制性内切酶Sal I、Nco I识别位点密码子之间，同时加入终止密码子TAG、TAA，分四段合成序列如下：片段1：5’-CATGGCTTTCAAATGCCGCCGTTGGCAGTGGCGTTGGAAAAAACTGGGTGCGGGTATCG-3’片段2：5’-GTAAATTCCTGCACTCTGCTAAAAAATTC<u>TAGTAA</u>G-3’片段3：5’-TCGAC<u>TTACTA</u>GAATTTTTTAGCAGAGTGCAGGAATTTACCGATACCC GCACCCAGTTT-3’片段4：5’-TTTCCAACGCCACTGCCAACGGCGGCATTTGAAAGC-3’下划线部分是加入的终止密码子TAG、TAA，斜体部分是限制内切酶SalI、Nco I识别序列，其余部分是牛乳铁蛋白-马盖宁杂合肽基因。