一种从贴底生长的细胞系获得细胞克隆球的方法

摘要：

本发明公开一种从贴底生长的细胞系获得细胞克隆球的方法，包括如下步骤：将细胞置于常规有血清培养基中进行常规培养，让细胞贴底生长；培养7～20天后，收集悬浮细胞；离心处理悬浮细胞，弃去上清液，再用HBSS液清洗剩余物；将清洗后的剩余物置于至少添加有生长因子的无血清培养基培养；培养10～20天后，即可获得克隆球，把悬浮的克隆球分离出来单独培养，贴底的克隆球和贴底细胞仍在一起培养，并定期更换培养基，即会持续不断地生长出新的克隆球。本发明方法简便，且不用消化酶，也不用机械方法制得单细胞悬液，可持续地获得遗传背景完全一致的干细胞克隆球；可广泛应用于干细胞理论研究、再生医学、新药开发等领域。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200710074498.6

申请日期：2007-05-17

公开/公告号：CN101092607

公开/公告日：2007-12-26

主分类号：C12N5/06(2006.01)I

申请/专利权人:深圳职业技术学院

发明/设计人:金 刚;代建国

主申请人地址:518055广东省深圳市南山区西丽湖

专利代理机构:深圳市维邦知识产权事务所

代理人:黄 莉

国别省市代码:广东;44

权利要求：

1、一种从贴底生长的细胞系获得细胞克隆球的方法，其特征在于，其包括如下步骤：步骤一、将细胞置于常规有血清培养基中进行常规培养，让细胞贴底生长；步骤二、培养7～20天后，当悬浮的细胞中，完整的单个细胞达到一定数量时，收集悬浮细胞；步骤三、将收集的悬浮细胞离心，弃去上清液，再用HBSS液清洗剩余物(含有具有较强增殖能力的单个细胞)；步骤四、将清洗后的剩余物置于至少添加有生长因子的无血清培养基培养；步骤五、培养10～20天后，即可获得直径在50～100微米的克隆球，克隆球部分呈悬浮状，部分为贴底生长，把悬浮的克隆球和贴底的克隆球及贴底细胞分开培养，并定期更换培养基以维持培养基中有效成分的含量，培养瓶中即会持续不断地生长出来新的克隆球。