一种人胚胎干细胞分化成平滑肌细胞的高效方法

摘要：

本发明属于人胚胎干细胞定向分化技术，旨在提供一种体外诱导人胚胎干细胞定向分化为平滑肌细胞的方法。该方法包括步骤：(1)人胚胎干细胞的培养；(2)用胰蛋白酶和EDTA消化分离成单细胞，培养后差别贴壁法获得纯化的人胚胎干细胞；(3)把分离纯化后的人胚胎干细胞接种在含诱导培养基I中培养10～15天，然后用诱导培养液II继续培养5～10天后，获得人平滑肌细胞。本发明具有方法简便、细胞分化均一度高，诱导周期短、效率高的优点。利用全反式维甲酸高效诱导人胚胎干细胞向平滑肌分化的体外系统，使平滑肌细胞在终级分化细胞中的比例达到93％以上。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200610154620.6

申请日期：2006-11-10

公开/公告号：CN1952120

公开/公告日：2007-04-25

主分类号：C12N5/08(2006.01)I

申请/专利权人:湖州市中心医院%浙江大学

发明/设计人:姚 行;张 铭;黄华荣;陈良标;戴利成

主申请人地址:313000浙江省湖州市红旗路198号

专利代理机构:杭州中成专利事务所有限公司

代理人:唐银益

国别省市代码:浙江;33

权利要求：

1、一种人胚胎干细胞分化成平滑肌细胞的高效方法，其特征在于包括如下步骤：(1)人胚胎干细胞的培养；(2)用0.05～0.25％胰蛋白酶和0.02～0.04％EDTA消化分离成单细胞，转入培养瓶中培养1.5个小时，差别贴壁法获得纯化的人胚胎干细胞；(3)把分离纯化后的人胚胎干细胞接种在诱导培养基I中，37℃，5％CO2的条件下培养10～15天，然后用诱导培养液II继续培养5～10天后，获得人平滑肌细胞。