一种提取植物RNA的方法
本发明公开了一种提取植物RNA的方法。该方法，包括以下步骤：1)在植物材料中加入60％-80％的丙酮和1％-3％的巯基乙醇，进行抽提，弃上清液，保留抽提过的植物材料；2)加入提取液I，并加入蛋白酶K，40-45℃水浴0.5-2小时；3)加入KCl，使其终浓度为150-180mol/L，-1～1℃放置1-3小时后，9000-13000g离心15-30分钟，收集上清溶液；4)加入LiCl，使其终浓度为1.5-2mol/L，0-5℃放置3-10小时后，9000-13000g，15-30分钟，收集沉淀；5)加入LiCl，使其终浓度为1-1.8mol/L mol/L，9000-13000g，15-25分钟，重复1-3次，得到的沉淀即为提取的RNA。该方法解决了RNA中多糖、酚类等化合物氧化问题；获得的RNA纯度高，操作过程中不易降解；RNA在提取过程中损失少。
发明专利
CN200610089308.3
2006-06-16
CN1884524
2006-12-27
C12N15/10(2006.01)I
北京未名凯拓农业生物技术有限公司
张莉莉;张 蕾;张会新;夏 勉;王喜萍
100085北京市海淀区上地西路39号北大生物城凯拓公司
北京纪凯知识产权代理有限公司
关 畅%任凤华
北京;11
权利要求书1、一种提取植物RNA的方法，包括以下步骤：1)在植物材料中加入含有体积百分含量为60％-80％的丙酮和体积百分含量为1％-3％的巯基乙醇混合液，进行抽提，9000-13000g离心10-20分钟，弃上清液，保留抽提过的植物材料；2)在步骤1)抽提过的植物材料中加入提取液I，并加入蛋白酶K，40-45℃水浴0.5-2小时；所述提取液I的pH为8-10，按如下方法配制：取SDS 0.2-1g，硼砂1-2g，脱氧胆酸或脱氧胆酸盐0.2-0.6g和EGTA 0.27-0.5g，加水定溶至20ml后用20μlDEPC振荡混匀，37℃放置4-10小时，灭菌后加入100-200μl 1M DTT、100-200μl Nonidet P-40和0.2-0.5g PVP-40，混匀后使用；3)加入KCl，使其终浓度为150-180mmol/L，-1～1℃放置1-3小时后，4℃，9000-13000g离心15-30分钟，收集上清溶液；4)在步骤3)收集的上清溶液中加入LiCl，使其终浓度为1.5-2mol/L，0-5℃放置3-10小时后，9000-13000g离心15-30分钟，收集沉淀；5)在步骤4)收集的沉淀中加入LiCl，使其终浓度为1-1.8mol/L，9000-13000g离心15-25分钟，重复1-3次，得到的沉淀即为提取的RNA。