一种制备单个卵裂球染色体的方法

摘要：

本发明提供了一种制备单个卵裂球染色体的方法，所述的方法如下：将正常的原核期受精卵去除卵丘、进行去核操作，获取胞质体，另选取经活检的单个人卵裂球，将所述卵裂球与胞质体进行电融合，得到异核体，将所得异核体诱导早熟染色体凝集形成，再将诱导后的异核体进行低渗，然后对异核体进行固定和染色，即可得到所述的单个卵裂球染色体。本发明方法通过对电融合掖、染色体诱导液、低渗液，以及固定步骤的进一步改进和完善，获得了效率高、质量好的单个卵裂球染色体的制备方法，制得染色体形态清晰、质量高，结合G-显带或全染色体涂抹探针的FISH技术，可克服现有间期核FISH技术存在的不足，使PGD的诊断范围扩大至整个染色体组。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200610052319.4

申请日期：2006-07-05

公开/公告号：CN1884522

公开/公告日：2006-12-27

主分类号：C12N15/10(2006.01)I

申请/专利权人:浙江大学

发明/设计人:徐晨明;黄荷凤

主申请人地址:310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号

专利代理机构:杭州天正专利事务所有限公司

代理人:黄美娟%王 兵

国别省市代码:浙江;33

权利要求：

权利要求书1.一种制备单个卵裂球染色体的方法，其特征在于所述的方法如下：将正常的原核期受精卵去除卵丘、进行去核操作，获取胞质体，另选取经活检的单个人卵裂球，将所述卵裂球与胞质体进行电融合，得到异核体，所述电融合步骤中所用电融合液组成终浓度为：山梨醇0.28M，硫酸镁0.1mM，牛血清白蛋白0.3％，余量为水；将所得异核体置于含秋水仙胺0.05～0.1μg/mL的人输卵管液中培养6～13小时，再用含0.1～0.2μg/mL细胞松弛素D、1.5～2.0μM花萼海绵诱癌素的人输卵管液处理，诱导早熟染色体凝集形成，再将诱导后的异核体置于含2％牛血清白蛋白的0.1％枸椽酸钠溶液中低渗15～20分钟，然后对异核体进行固定和染色，即可得到所述的单个卵裂球染色体。