一种具有厌氧氨氧化活性的反硝化菌的分离、鉴定方法
本发明公开一种具有厌氧氨氧化活性的反硝化菌的分离、鉴定方法。它采用一种新的厌氧氨氧化菌分离鉴定程序。即先分离反硝化菌，再以厌氧条件下同时转化氨和亚硝酸盐的能力作为判据，确认该菌为厌氧氨氧化菌，最后鉴定该菌的分类地位。本发明的优点是：1)可以获得厌氧氨氧化菌的纯培养物，为微生物学研究和工业化应用提供纯种；2)反硝化厌氧氨氧化菌生长较快，易探明被分离菌株的生理生化特性，便于菌种保藏和大量扩增；3)分离、鉴定程序简单，结果可信，易于推广应用。
发明专利
CN200610049500.X
2006-02-14
CN1807594
2006-07-26
C12N1/20(2006.01)I
浙江大学
郑 平;胡宝兰
310027浙江省杭州市浙大路38号
杭州求是专利事务所有限公司
张法高
浙江;33
1、一种具有厌氧氨氧化活性的反硝化菌的分离方法，其特征在于，方法的步骤如下：1)选取同时具有氨和硝酸盐或亚硝酸盐的自然生境和人工生境样品作为具有厌氧氨氧化活性的反硝化菌的分离源，自然生境样品主要是渍水土壤、沼泽地污泥、湖泊底泥、海洋沉积物，人工生境样品主要是城市污水处理厂曝气池污泥、城市污水处理厂厌氧消化池污泥、各种废水生物脱氮处理系统中的活性污泥。2)以含有0.1mg/L～1mg/L酵母膏或葡萄糖的基本无机盐液体培养基作为富集基质，采用连续培养或分批培养的方式，培育厌氧氨氧化生物膜、絮体或颗粒污泥；3)取厌氧氨氧化生物膜、絮体或颗粒污泥，用超声波破碎，制成初级菌悬液，再逐级稀释制成系列菌悬液。4)以反硝化培养基，采用厌氧平板划线法分离反硝化菌，在28-30℃下厌氧培养。将平板上长出的单菌落挑入液体培养基中，在28-30℃下厌氧培养，培养后，再采用厌氧平板划线法分离单菌落，如此重复数次。当在显微镜下观察到的细菌细胞形态一致时，即认为目标菌株己被纯化。