一种从矛头蝮蛇毒中提取单一成份巴曲酶的方法
一种从蛇毒中提取具有降纤溶栓作用或止血作用的巴曲酶的方法，属于医药技术领域。步骤包括如下：蛇毒经浸泡溶解、离心；上清液经亲和柱层析；洗脱液直接流经葡聚糖凝胶G25脱盐层析；含有效成份的洗脱液经包埋、浓缩；浓缩样品再经分子筛层析，即可得到单一成份的巴曲酶。本方法具有适合规模化生产、操作简便、生产周期短、产品纯度高等特点。
发明专利
CN200610044594.1
2006-05-25
CN101078009
2007-11-28
C12N9/68(2006.01)I
齐鲁制药有限公司
刘禄娟;张润平;于 萍;张明会;王晶翼
250100山东省济南市历城区工业北路243号
济南舜源专利事务所有限公司
苗 峻
山东;37
权利要求书1、从矛头蝮蛇的两个亚种(Bothrops moojeni或Bothrops atrox)蛇毒中提取单一成份巴曲酶的方法，步骤包括：(1)蛇毒用缓冲液I浸泡、溶解过夜，然后离心去除沉淀，得上清液；(2)蛇毒上清液上亲和层析柱，用缓冲液I进行洗脱，至蛋白检测仪读数达到基线，再用缓冲液II洗脱，核酸蛋白检测仪检测样品峰，收集得巴曲酶粗提液；(3)巴曲酶粗提液直接流经葡聚糖凝胶G25(Sephadex G25)脱盐柱，去除苯甲脒盐酸盐(Benzamidine·HCL)；(4)去除苯甲脒盐酸盐的巴曲酶粗提液用透析膜或超滤装置或脱盐柱更换缓冲液III；(5)巴曲酶粗提液上经缓冲液III平衡的阳离子交换层析柱，使用NaCl离子强度梯度缓冲液或pH梯度缓冲液洗脱，核酸蛋白检测仪检测样品峰，收集样品溶液；(6)样品溶液经聚乙二醇20000(PEG20000)包埋浓缩，或经超滤浓缩，经分子筛层析柱，用缓冲液IV洗脱，即得单一组份巴曲酶。在上述步骤中，缓冲液I是pH6.0～10.0含0.1～2.0M NaCL的Tris-HCL缓冲液或甘氨酸-NaOH缓冲液或磷酸盐(磷酸氢二钠-磷酸二氢钠)缓冲液；缓冲液II是pH6.0～10.0含0.1～0.5M NaCL和0.1～0.5M苯甲脒盐酸盐(Benzamidine·HCL)的Tris-HCL缓冲液或甘氨酸-NaOH缓冲液或磷酸盐缓冲液；缓冲液III是pH5.0～6.5、浓度为0.001～0.05M的磷酸盐缓冲液或乙酸盐(乙酸钠-乙酸)缓冲液或枸橼酸盐(枸橼酸钠-枸橼酸)缓冲液或Tris-HCL缓冲液；缓冲液IV是pH4.0～8.0含0.01～0.5M NaCL的柠檬酸盐缓冲液或Tris-HCL缓冲液或磷酸盐缓冲液或乙酸盐缓冲液；步骤(2)中所述亲和层析柱是指苯甲脒琼脂糖凝胶6B(Benzamidine Sepharose 6B)或苯甲脒琼脂糖凝胶4B(Benzamidine Sepharose 4B)层析柱；步骤(5)中所述的阳离子交换层析柱是指磺丙基琼脂糖凝胶(SP Sepharose)、甲基磺酸盐琼脂糖凝胶(S Sepharose)或羧甲基琼脂糖凝胶(CM Sepharose)层析柱；步骤(6)中所述的分子筛层析柱是丙烯葡聚糖凝胶S200(Sephacryl S200)或丙烯葡聚糖凝胶S100(Sephacryl S100)或Superdex-75层析柱。