一种融合蛋白的酵母表达载体及其基因工程产品
本发明涉及一种融合蛋白的酵母表达载体及其基因工程产品，属于生物技术制药工业中的基因工程生产疫苗药物的技术领域。分别以乙脑E蛋白基因和人结核杆菌H37Rv标准株的基因组为模板扩增出E蛋白主要抗原片段基因和M.Thsp70基因，先将这两个基因以一个酶切位点BamHI连接的方式克隆入pBluescript SK+质粒中，最后将该融合基因克隆入pPICZ α-A中，构建酵母表达载体pPICZ α-E-hsp70，按照说明书，该融合表达载体pPICZ α-E-hsp70线性化后，电转化酵母菌，通过甲醇诱导表达，从而获得融合蛋白E-hsp70，来开发研制相关的基因工程产品。
发明专利
CN200610040766.8
2006-06-01
CN1869239
2006-11-29
C12N15/81(2006.01)I
南京农业大学
陈溥言;葛菲菲;邱亚峰;曹瑞兵;周 斌
210095江苏省南京市卫岗1号南京农业大学科技处钱宝英
南京经纬专利商标代理有限公司
楼高潮
江苏;32
权利要求书1、一种融合蛋白的酵母表达载体，是通过以下方法获得的：1)设计引物：上游引物p1：5’GAATTCATCCTCCTGCTGTTGGTC3’；下游引物p2：5’GGATCCGAAGGGGTTCACTGTCAC3’；以乙脑E蛋白基因为模板，通过PCR方法扩增获得乙脑E蛋白上主要抗原片段基因，E蛋白上主要抗原片段基因位于乙脑SA14-14-2毒株基因组的946nt-2058nt；2)设计引物：上游引物p1：5’GGATCCATGGCTCGTGCGGTCGGGATCGACC3’；下游引物p2：5’TCTAGAAACTTGGCCTCCCGGCCGTCGTCG3’；以人结核杆菌H37Rv标准株的基因组为模板，PCR方法扩增出M.T hsp70基因，M.T hsp70基因登录号为X58406；3)首先将E蛋白上主要抗原片段基因用酶切位点EcoR I和BamH I连接到pBluescript SK+质粒中，然后将M. Thsp70基因用酶切位点BamH I和Xba I连接到pBluescript SK+质粒中E蛋白主要抗原片段基因的下游，因此获得将E蛋白主要抗原片段基因和M.T hsp70基因融合在pBluescript SK+上的载体SK-E-hsp70，再通过EcoR I和Xba I这两个酶切位点将E蛋白主要抗原片段基因和M.T hsp70基因形成的融合基因切下来，随后同样通过EcoRI和Xba I这两个酶切位点连接到毕赤酵母表达载体pPICZ α-A上，从而构建成功融合酵母表达载体pPICZ α-E-hsp70。