人头皮毛乳头细胞的高效快速分离方法

摘要：

本发明公开一种毛乳头细胞的高效快速分离方法，该方法采用两步消化法消化头皮，即先用胶原酶I消化，再用胰酶消化，得到上皮细胞群并进行接种、培养。该方法对整块头皮进行批量处理，从中分离出毛乳头细胞，具有高效快速的显著效果。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200610034481.3

申请日期：2006-03-22

公开/公告号：CN1831118

公开/公告日：2006-09-13

主分类号：C12N5/08(2006.01)I

申请/专利权人:南方医科大学

发明/设计人:胡志奇;孙锡金

主申请人地址:510515广东省广州市广州大道北1838号

专利代理机构:广州市天河庐阳专利事务所

代理人:胡济元

国别省市代码:广东;44

权利要求：

1、一种人头皮毛乳头细胞的高效快速分离方法，依次包括以下步骤：(1)头皮的处理：去除毛发及皮下组织中的脂肪和结缔组织，制成0.3-0.5cm宽的皮条，用浓度为2.5g/L的洗必泰溶液中浸泡消毒10-15min，然后浸入浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)中，震荡洗涤三遍；(2)消化过滤法：除去皮下组织以上的部分，破碎，在37℃下以90rpm速度搅拌并加入0.2％胶原酶I，搅拌消化2小时后悬液过400目筛，再用为浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲液过滤洗净被筛网截留的毛乳头，收集；(3)培养基的配制：往DMEM培养基加入胎牛血清，使胎牛血清的体积含量为15％；(4)细胞的培养：每个培养皿放置10个毛乳头并加入所制备的DMEM培养基2ml，然后放入5％CO2的培养箱中培养；4天后第一次换液，其后每周换液2次，培养到第14天，倒掉培养液，加入质量浓度为0.1％的胰酶2ml，静置2分钟后加入含15％胎牛血清的DMEM培养基2ml终止消化，吹打后1000rpm离心8分钟，再加入15％胎牛血清的DMEM培养基2ml，用吸管吹打均匀后培养便得。