一种从细菌中提取高分子量基因组的方法

摘要：

一种从细菌中提取高分子量基因组的方法，包括采用溶菌酶+蛋白酶+SDS或采用蛋白酶+SDS破壁、TE缓冲液抽提(去蛋白，多糖等)、经沉淀、洗涤干燥、溶解。本发明从影响提取DNA片段大小的因素入手，提取了较常规所提片段大的高分子DNA片段，提取的基因组DNA达到40kb以上，经吸光度检测，OD260/OD280比值在1.8-2.0之间。方法重复性好，操作简单，完全能满足上述分子操作。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200610032560.0

申请日期：2006-11-10

公开/公告号：CN1952150

公开/公告日：2007-04-25

主分类号：C12N15/31(2006.01)I

申请/专利权人:中南大学

发明/设计人:柳建设;夏乐先;邱冠周;高 健;闫 颖;曾 嘉

主申请人地址:410083湖南省长沙市麓山南路1号

专利代理机构:中南大学专利中心

代理人:龚灿凡

国别省市代码:湖南;43

权利要求：

1.一种从革兰氏阳性菌中提取高分子量基因组的方法，其特征在于：包括破壁、抽提、沉淀、洗涤干燥、溶解，具体工艺过程如下：破壁：用400-500ul的TE缓冲液悬浮细菌，加入45-50ul、20mg/ml的溶菌酶和40-60ul、20％的SDS，37℃温浴1h后加入6-7ul、20mg/ml的蛋白酶K，37℃温浴1h；抽提：对破壁后的细菌加入170-220ul的CTAB/NaCl溶液去多糖，采用等体积的氯仿/异戊醇，离心去除蛋白和多糖及其它复合物；沉淀：吸取上清至离心管中，向其中加入0.8-1.2倍体积的异丙醇，沉淀DNA；洗涤干燥：加入0.8-1.2倍体积的无水乙醇，混匀，充分凉干，；溶解：加入30-50ul的无菌去离子水或TE溶解DNA；所述TE缓冲液为：1mol/L Tris·Cl，pH8.0，0.5mol/L EDTA，0.5 mol/L柠檬酸，加水至1000ml；所述CTAB/NaCl溶液为：4.1g NaCl溶解于80ml水，缓慢加入10g CTAB，加水至100ml；所述氯仿为∶异戊醇(24∶1)，异丙醇，70％乙醇，20％SDS，蛋白酶K(20mg/ml)，溶菌酶(20mg/ml)。