一种提高植物耐盐性能的方法
本发明涉及一种提高植物耐盐性能的方法。本发明首次利用基因工程手段，构建受ABA诱导的海藻糖水解酶基因AtTRE的特异性高效沉默载体，通过农杆菌介导法，用卡那霉素作为筛选标记成功转化拟南芥。逆境下成功地下调了海藻糖水解酶基因AtTRE的表达，改变了植物体内海藻糖代谢状况，培育出耐盐的新型拟南芥。本方法有望进一步推广应用于农作物，经济作物的品种改良，因而本发明有一定的理论意义和科研应用价值。
发明专利
CN200610026982.7
2006-05-26
CN1869240
2006-11-29
C12N15/82(2006.01)I
上海大学
宋任涛;许政暟;赵雅瑞
200444上海市宝山区上大路99号
上海上大专利事务所
何文欣
上海;31
权利要求书1.一种提高植物耐盐性能的方法，其特征在于该方法具有如下步骤：a.选定目标植物，根据该植物的核苷酸序列AtTER和启动子核苷酸序列RD29A，RD29B，构建基因沉默载体RD29A：：AtTRE-pART27和RD29B：：AtTRE-pART27；b.采用Floral dip法转化法，将上述基因沉默载体RD29A：：AtTRE-pART27和RD29B：：AtTRE-pART27转化到目标植物的花序上，培养出转基因植株；c.用卡那霉素筛选上述转基因植株。2.根据权利要求1所述的一种提高植物耐盐性能的方法，其特征在于所述的构建基因沉默载体的方法具体为：a.根据目标植物的AtTER的编码区核苷酸序列，选择不含保守区段的位于AtTRE全长cDNA的5’端，长度约500bp，用Primer Premier软件设计两对引物：ATREP1、ATREP2和ATREP3、ATREP4；b.根据目标植物的RD29A，RD29B启动子核苷酸序列，用Primer Premier软件设计两对引物RD29AP1、RD29AP2和RD29BP1、RD29BP2；c.PCR反应：以第一对引物ATREP1、ATREP2进行高保真PCR反应，用PCR产物快速胶回收试剂盒回收PCR产物；d.酶切反应：KpnI酶切上述的PCR回收产物，酶切完全后用快速胶回收试剂盒回收酶切产物，即K片断，同时用KpnI酶切pHANNIBAL载体，酶切完全后用SAP去磷酸反应，然后用快速胶回收试剂盒回收酶切产物；e.连接反应：取适量的上述酶切产物，用T4DNA连接酶16℃连接过夜；f.检测：连接产物转化大肠杆菌DH5a，涂LB固体培养基平板(含50mg/L Kana)，37℃培养约16小时，挑单克隆，扩大培养后提质粒，用鉴定引物进行PCR检测，用限制性内切酶PstI酶切检测AtTRE插入片段，验证K片断是否正确到pHANNIBAL载体上，选取阳性克隆测序；g.第二片断(C片断)的插入：以第二对引物ATREP3、ATREP4限制性内切酶PstI重复上述反应；h.将经检测证明该基因的K片断和C片断以正确方向插入到pHANNIBAL载体上的重组子AtTRE-pHANNIBAL，转化DH5a，提质粒检测后-80℃保存质