一种双小分子干扰RNA载体的构建方法及应用

摘要：

本发明公开了一种双小分子干扰RNA载体的构建方法及应用，其步骤是：第一是双siRNA产生载体的构建引物合成；第二是siRNA产生模板PCR扩增；第三是克隆和测序；该载体在制备治疗或抑制HBV、HIV混合感染药剂中的应用。本发明的双siRNA能同时抑制两种病毒的复制，双siRNA载体的构建方法简单，操作方便。RNA干扰效率高，抑制基因表的效率可达90％以上，只使具有与siRNA同源序列的基因表达沉默而不影响其它基因的功能，所以特异性强，无毒副作用。因此用双siRNA治疗病毒混合感染是一种非常有前途的方法。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200610019143.2

申请日期：2006-05-26

公开/公告号：CN1869237

公开/公告日：2006-11-29

主分类号：C12N15/63(2006.01)I

申请/专利权人:武汉大学

发明/设计人:吴建国;邬开朗;朱 应

主申请人地址:430072湖北省武汉市武昌珞珈山

专利代理机构:武汉宇晨专利事务所

代理人:王敏锋

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

权利要求书1、一种双小分子干扰RNA载体的构建方法，它包括下列步骤：A、双小分子干扰RNA产生载体的构建引物合成：设计了一对引物，上游引物：5’-GCTGATGACGTCAGTGGAAAGACGCG-3’，下游引物：5’-TCAGCGAATTCACGCCAAGCTTTTCC-3’；B、小分子干扰RNA产生模板PCR扩增：以乙型肝炎病毒S基因的小分子干扰RNA表达载体为模板，用A步骤合成的引物进行扩增得到PCR产物，用1％琼脂糖凝胶对PCR产物进行电泳，纯化回收试剂盒纯化；C、克隆和测序：将回收的DNA片段用AatII和EcoRI进行双酶切后连接到人免疫缺陷病毒小分子干扰RNA表达载体上的AatII和EcoRI位点之间，产生一个能同时表达乙型肝炎病毒S基因的小分子干扰RNA和人免疫缺陷病毒小分子干扰RNA两个小分子干扰RNA的质粒psilencer2.1-U6-HBV-HIVsiRNA，筛选到的阳性克隆测序证实，便得到双siRNA表达载体。