一种基于液相芯片检测禽流感病毒H5N1亚型的方法
本发明是基于液相芯片检测禽流感病毒H5N1亚型的方法，其利用液相芯片技术，运用生物信息学知识和相关的生物信息学软件，对在核酸序列库中能够检索到的所有的H5、N1血清亚型核酸序列进行同源性分析，找出保守区域，设计出针对禽流感病毒H5和N1基因片断的简并引物和特异性探针，特异性探针通过与荧光编码微球进行偶联制成特异性检测微球，即液相芯片；液相芯片能够特异性的识别禽流感病毒H5和N1基因片断，通过两轮PCR反应，并通过液相芯片检测仪读出检测结果。本发明能够对禽流感病毒H5N1亚型进行快速检测和进行早期诊断，并为开发出检测H5N1亚型和其它各种亚型流感病毒更为快速有效的方法提供了一条广阔的前景。
发明专利
CN200610018603.X
2006-03-21
CN1858249
2006-11-08
C12Q1/68(2006.01)I
中国科学院武汉病毒研究所
王华林;夏 骏;袁 丽;邓 菲;胡志红
430071湖北省武汉市武昌小洪山中区44号
湖北武汉永嘉专利代理有限公司
王守仁
湖北;42
权利要求书1.一种检测禽流感病毒H5N1亚型的方法，其特征是一种基于液相芯片检测禽流感病毒H5N1亚型的方法，具体是：利用液相芯片技术，运用生物信息学知识和相关的生物信息学软件，对在核酸序列库中能够检索到的所有的H5、N1血清亚型核酸序列进行同源性分析，找出保守区域，设计出针对禽流感病毒H5和N1基因片断的简并引物和特异性探针，简并引物包括特异性检测引物和生物素修饰的通用引物，特异性探针通过与荧光编码微球进行偶联制成特异性检测微球，即液相芯片；液相芯片能够特异性的识别禽流感病毒H5和N1基因片断，通过两轮PCR反应，并通过液相芯片检测仪读出检测结果，特异性检测引物为：H5-1For：5′-tac agt cgg tcg cgt gcc tcg gac aat ttt raa rcc raa tg-3′H5-1Rev：5′-ctg gtc cgt act tcc gag cgt tat cgc mcc cay tgg ag-3′H5-2For：5′-tac agt cgg tcg cgt gcc tca atg gac aaa gtg gaa gaa t-3′H5-2Rev：5′-ctg gtc cgt act tcc gag cga agg cata ctr gaa ttt ata g-3′N1-1For：5′-tac agt cgg tcg cgt gcc tcg caa ttc atc tct ttg ycc-3′N1-1Rev：5′-ctg gtc cgt act tcc gag cgc acc cac agg aca act c-3′N1-2For：5′-tac agt cgg tcg cgt gcc tcc tcy cac ttg gar tgc ag-3′N1-2Rev：5′-ctg gtc cgt act tcc gag cgc crt tgt att tca ata cag c-3′，生物素修饰的通用引物为：Uni-For：5′-tac agt cgg tcg cgt gcc tc-3′Uni-Rev：5′-biotin-ctg gtc cgt act tcc gag cg-3′，特异性检测探针为：H5-1Probe：5′-NH2-tat gca tac aaa att gtc aag aar gg-3′H5-2Probe：5′-NH2-ccw gaa tat gca tac aag ata gtt aa-3′N1-1Probe：5′-NH2-aaa tcc aag ggg gat gtg ttt gtt rt-3′N1-2Probe：5′-NH2-gtt ggt tga caa ttg gwa ttt cyg g-3′。