一种硬组织低温包埋冷凝酯的制备方法
本发明公开了一种硬组织低温包埋冷凝酯的制备方法，其步骤是首先对骨组织用金刚沙片切锯成1～2cm的厚度，后放入固定液中，保存；其次是冲洗好的样品进行酒精梯度脱水；第三是脱水完成后，放入渗透中间液，后放入渗透液，间歇抽真空；第四是将渗透好的组织放入包埋瓶中，加入新鲜包埋液，放入冰箱中聚合；第五是聚合完成后，破碎包埋瓶，取出包埋块，在硬组织切片机上进行切片，切片附于载玻片上，干燥；第六是染色处理。本发明简单易行，抗原和酶活性保存完好，冷凝酯渗透好，聚合后硬度高，易于切片，后期容易脱掉，染色后效果好。
发明专利
CN200610018455.1
2006-03-02
CN1814756
2006-08-09
C12N11/04(2006.01)I
武汉大学
陈 东;张 旗
430072湖北省武汉市武昌珞珈山
武汉宇晨专利事务所
王敏锋
湖北;42
1、一种硬组织低温包埋冷凝酯的制备方法，它包括下列步骤：A、对骨组织用金刚沙片切锯成1～2cm的厚度，切锯的过程中流水冲洗，完成后放入预冷的固定液中，4℃保存；B、冲洗好的样品进行酒精梯度脱水：30％-50％-60％-70％-85％-90％-95％-100％-100％，均在4℃中进行，每个浓度时间为2～3小时，间歇抽真空处理/-0.64大气压，15分钟/小时；C、脱水完成后，放入渗透中间液/PMG/二甲苯的体积比为1∶1中1小时，4℃，然后放入渗透液/冷凝酯基础原液/聚乙二醇-400体积比为100∶2渗透液中含有1.5％干燥处理过的过氧化苯甲酰，时间为2小时，温度为4℃，间歇抽真空；D、将渗透好的组织放入包埋瓶中，加入新鲜包埋液/冷凝酯基础原液/聚乙二醇-400/NN-二甲基苯胺的体积比为100∶5∶1，内含3％过氧化苯甲酰，放入-20℃冰箱中，聚合时间为3～5天；E、聚合完成后，破碎包埋瓶，取出包埋块，在硬组织切片机上进行切片，切片厚度为5um，利用超薄切片机上进行超薄切片，用作透射电镜观察，5um切片附于明胶镀膜过的载玻片上，在37℃温箱中干燥48小时；F、染色处理，以免疫组化染色，将切片放入乙二醇乙醚醋酸酯，时间为2小时，中间应更换乙二醇乙醚醋酸酯在二甲苯中放置20分钟，中间更换二甲苯二次，切片进行酒精梯度回水：100％-95％-90％-85％-70％-60％-50％-30％-水，进行免疫组化染色。