一种莱茵衣藻外源基因表达系统及其构建生产PHB转基因藻的方法
本发明公开了一种莱茵衣藻外源基因表达系统及其构建生产PHB的转基因藻的方法，由启动子、外源目的基因、筛选标记和莱茵衣藻受体藻株组成。利用该系统构建生产PHB的转基因的方法：A.受体藻株的选择与培养；B.PHB生物合成关键酶基因的克隆；C.PHB生物合成关键酶莱茵衣藻表达载体，D.通过珠磨法、基因枪法或电激法，从真养产碱杆菌分离出的PHB生物合成关键酶基因导入莱茵衣藻中，经过筛选和分子检测获得生产PHB的二价或转基因衣藻。利用光合作用产生的乙酰辅酶A为底物，在phbA、phbB和phbC基因编码的PHB合成关键酶的共同作用下，合成聚β-羟基丁酸。方法易操作、成本低廉、产物易分离、安全，解决了白色污染的问题。
发明专利
CN200610018306.5
2006-01-26
CN1807649
2006-07-26
C12N15/79(2006.01)I
深圳大学
胡章立;王潮岗;宋艳茹
518060广东省深圳市南山区南油路2336号
武汉宇晨专利事务所
王敏锋
广东;44
1、一种莱茵衣藻外源基因表达系统，它包括强启动子、外源目的基因、终止子、筛选标记和莱茵衣藻受体藻株，首先是转基因受体藻的筛选与培养，选择莱茵衣藻作为受体藻，采用Tris-acetate-phosphate培养基，在光照～90μE/m2.s的条件下，通气培养至对数生长后期，藻细胞浓度达到108-109cells/mL时，离心收集；其次是含有筛选标记基因表达盒的外源基因表达载体构建：A、外源基因莱茵衣藻细胞核表达载体的构建，该载体含有RBCS2启动子或Hsp70A-RBCS2合成启动子、RBCS2终止子和ble基因筛选标记表达盒，通过基因枪法、珠磨法或电激法将外源基因导入莱茵衣藻核基因组中，通过腐草霉素或Zeomycin筛选获得转基因衣藻；B、莱茵衣藻叶绿体表达载体的构建，该系统含有rbcL启动子和rbcL终止子，以psbA基因外显子5和23SrRNA的3′端的序列为同源重组片段，通过基因枪法、珠磨法或电激法将外源基因定点整合到莱茵衣藻叶绿体的psbA基因外显子5和23SrRNA3′端基因序列之间，以16SrRNA为筛选标记，获得转基因衣藻。