一种AT选择性高频率诱变的方法

摘要：

本发明公开了一种AT选择性高频率诱变方法。其步骤包括以dUTP为媒介进行第一轮PCR扩增，得到含dUMP的杂合DNA分子；以该DNA分子为模板，进行第二轮PCR扩增；通过部分U与G配对，获得AT碱基分别被GC替换的突变DNA分子或者在第一轮PCR扩增后，以含有dUMP的杂合DNA分子为模板，在0.5mM Mgcl₂存在下进行在第二轮PCR扩增，获得高突变频率的DNA分子。本发明的AT选择性诱变方法突变频率为0.86％.其中AT转换为其它碱基数占总突变碱基数的96.5％；高频率诱变方法的突变率为4.0％。其中AT转换为其它碱基数占总突变碱基的90.4％。本发明的方法可用于DNA分子的体外改良。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200610018256.0

申请日期：2006-01-19

公开/公告号：CN1807618

公开/公告日：2006-07-26

主分类号：C12N15/11(2006.01)I

申请/专利权人:华中农业大学

发明/设计人:刘子铎;张炼辉;洪玉枝;喻子牛

主申请人地址:430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号

专利代理机构:武汉宇晨专利事务所

代理人:王敏锋

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

1、一种AT选择性高频率诱变的方法，其特征在于，以dUTP为媒介进行第一轮PCR，得到含dUMP的杂合DNA分子；以该DNA分子为模板，进行第二轮PCR；通过部分U与G配对，获得AT碱基分别被GC替换的突变DNA分子。