一种适用于大规模生产质粒DNA的纯化方法

摘要：

本发明涉及一种适用于大规模生产质粒DNA的纯化工艺，属于生物制药领域。通过对碱裂解后的产品进行超滤、离子交换层析、疏水层析、分子筛层析、除菌过滤、无菌浓缩最终得到符合药用浓度的质粒DNA。本发明纯化的质粒DNA总回收率可达到50％以上，其产品各项检定项目均符合国家标准。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200610016880.7

申请日期：2006-05-26

公开/公告号：CN1876820

公开/公告日：2006-12-13

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

申请/专利权人:吉林大学

发明/设计人:孔 维;殷玉和;孙 博

主申请人地址:130012吉林省长春市前卫路10号

专利代理机构:吉林长春新纪元专利代理有限责任公司

代理人:魏征骥

国别省市代码:吉林;22

权利要求：

权利要求书1、一种适用于大规模生产质粒DNA的纯化方法，包括以下步骤：一、在含有5-20kb质粒DNA的裂解液中，加入氯化钙或硫酸铵溶液，使终浓度为0.2-2M/L盐析沉淀，过孔径1.0um滤膜得到澄清的裂解液；二、使含有质粒DNA的裂解液经过超滤装置而过滤，截留分子量100-750KD之间，除去大部分RNA，并通过合适的透滤液进行透滤；三、将超滤获得的浓缩裂解液上样到离子交换层析介质柱子后，经过浓度为0.1-0.5M的氯化钠洗脱液洗去杂质，用浓度为0.5-1M的氯化钠洗脱液洗脱后，得到含行质粒DNA的洗脱液；四、将步骤三中得到的含有质粒DNA的洗脱液，用硫酸铵调节电导率为100-300ms/cm，上样到预先平衡好的疏水层析介质柱子后收集流穿峰；五、将疏水流穿峰样品上样到分子筛层析介质柱子，收集第一个峰；六、将步骤五得到的分子筛样品，经过过滤器和超滤器联动装置使样品在无菌的条件下更换合适的缓冲液及使质粒DNA浓度浓缩到符合药用标准。