一种新的食线虫真菌来源的丝氨酸蛋白酶基因及其应用

摘要：

本发明涉及一种新的食线虫真菌来源的丝氨酸蛋白酶基因及其应用，属于分子生物学和应用微生物学领域。本发明选择在GenBank上发表的其它来源的丝氨酸蛋白酶的编码基因，利用DNAman生物学软件进行同源性分析，根据保守序列设计了一对简并引物。以异形隔指孢的基因组DNA作为模板，利用简并引物扩增得到蛋白酶编码基因的保守序列。再利用DNA Walking SpeedUp^TM Premix试剂盒扩增得到5′端的未知序列，把两段序列进行拼接得到异形隔指孢胞外丝氨酸蛋白酶编码基因的全序列。异形隔指孢所产生的胞外蛋白酶对线虫有较高的杀虫活性，可以通过分子生物学手段把该蛋白酶编码基因Dv1转化其它的线虫生防真菌，实现Dv1的异源表达，提高线虫生防真菌胞外蛋白酶的表达量和对植物寄生线虫的生防能力。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200610010848.8

申请日期：2006-04-26

公开/公告号：CN1858211

公开/公告日：2006-11-08

主分类号：C12N15/57(2006.01)I

申请/专利权人:云南大学

发明/设计人:杨金奎;梁连铭;张 楹;张克勤

主申请人地址:650091云南省昆明市五华区翠湖北路2号

专利代理机构:昆明正原专利代理有限责任公司

代理人:杨宏珍

国别省市代码:云南;53

权利要求：

权利要求书1、一种新的食线虫真菌来源的胞外丝氨酸蛋白酶基因，该基因由真菌的分离与培养、真菌基因组DNA的提取、保守序列的扩增、5′端未知序列的扩增、扩增片段测序及测序结果分析步骤得到，其特征在于：(1)选择在GenBank上发表的索引号是X94121、AF516146、L29262、AJ427460、AF154118、AJ251925的不同真菌来源的丝氨酸蛋白酶的编码基因；(2)利用DNAman生物学软件进行同源性分析，根据保守序列设计简并引物：上游引物P1：5′-AARTAYATYGTCGTCYWSAAG-3′下游引物P2：5′--TTAAGYRKHKCCRTTGWAG-3′简并碱基代码：R＝A/G，W＝A/T，S＝G/C，Y＝C/T，K＝G/T，H＝A/C/T；(3)利用简并引物扩增得到蛋白酶编码基因的保守序列，再利用DNA WalkingSpeedUpTM Premix试剂盒扩增得到5′端的未知序列，把两段序列进行拼接得到没有内含子序列的异形隔指孢胞外丝氨酸蛋白酶编码基因的全序列Sequence118.ST25；