一种可用于制作禽类疫苗的重组杆状病毒的制备方法

摘要：

一种可用于制作禽类疫苗的重组杆状病毒的制备方法，它涉及一种重组杆状病毒的制备方法。它为制作出可防治禽类传染性疾病的重组杆状病毒疫苗奠定了物质基础。其制备方法：(一)构建含有CMV-IE启动子的载体；(二)构建带有CMV-IE启动子和外源基因的重组载体；(三)构建重组杆状病毒，收集病毒粒子测定病毒效价；(四)检测重组杆状病毒外源基因的表达；步骤(三)包括1.重组载体转化DH10Bac细胞；2.提取重组杆状病毒BacmidDNA；3.PCR扩增Bacmid DNA；4.Bacmid DNA转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒；5.扩增重组杆状病毒；6.蚀斑试验；7.蚀斑纯化；8.收集重组杆状病毒粒子；9.测定重组杆状病毒效价。本发明为制作出可防治禽类传染性疾病的重组杆状病毒疫苗奠定了物质基础。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200610009656.5

申请日期：2006-01-23

公开/公告号：CN1807602

公开/公告日：2006-07-26

主分类号：C12N7/01(2006.01)I

申请/专利权人:黑龙江大学

发明/设计人:楼庄伟;平文祥;葛菁萍;李盛贤;宋 刚;凌宏志;高冬妮;张贺楠

主申请人地址:150080黑龙江省哈尔滨市南岗区学府路74号

专利代理机构:哈尔滨市松花江专利商标事务所

代理人:岳泉清

国别省市代码:黑龙江;23

权利要求：

1、一种可用于制作禽类疫苗的重组杆状病毒的制备方法，其特征在于按下述步骤制备重组杆状病毒：(一)构建含有CMV-IE启动子的穿梭质粒载体pFastBac1-pcDNA3.1(-)；(二)构建带有CMV-IE启动子和外源基因的重组穿梭质粒载体pFastBac1-pcDNA3.1(-)’；(三)构建重组杆状病毒，并收集病毒粒子测定病毒效价；(四)检测重组杆状病毒外源基因的表达；所述的步骤(三)包括1.用重组穿梭质粒载体pFastBac1-pcDNA3.1(-)’转化DH10Bac细胞；2.提取重组杆状病毒BacmidDNA；3.特异引物PCR扩增重组杆状病毒BacmidDNA；4.重组杆状病毒BacmidDNA转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒；5.扩增重组杆状病毒；6.蚀斑试验；7.蚀斑纯化；8.收集重组杆状病毒的病毒粒子；9.测定重组杆状病毒的病毒效价。