一种生物降解烟碱的方法
本发明涉及一种生物降解烟碱的方法，它是以烟碱降解细菌(Ochrobactrum intermedium)DN2为菌种，利用Ochrobactrum intermedium DN2或Ochrobactrum intermediumDN2的尼古丁降解酶作用于复烤烟叶、烟丝、工农业烟草下脚料以及烟草废弃物以及上述各种对象的水提液，使烟碱发生部分或全部的降解。采用本发明可使复考烟叶的烟碱降解40～48％；烟丝中的烟碱降解降低35～56％；烟草抽提液中的烟碱降解75～98％。该法属于生物降解法，特异性强，效果显著，生产成本低，可用于烟草加工，烟草造纸以及环境保护等领域。
发明专利
CN200510122831.7
2005-12-06
CN1800361
2006-07-12
C12N1/20(2006.01)I
南京农业大学
陆兆新;袁勇军;吕凤霞;别小妹;李 颖
210095江苏省南京市卫岗1号南京农业大学科技处钱宝英
南京经纬专利商标代理有限公司
楼高潮
江苏;32
1、一种生物降解烟碱的方法，其特征在于：1)烟碱降解细菌(Ochrobactrumintermedium)DN2的扩大培养普通培养基g/L：胰蛋白胨11.34、牛肉膏3.00、NaCl5.00、MgSO4·7H2O3.71、pH值7.23；基础培养基g/L：NH4NO31.00、MgSO4·7H2O0.50、(NH4)2SO40.50、KH2PO40.50、NaCl0.50、K2HPO41.50、pH值7.0；烟草抽提液：烟草废弃物和水按1∶10的比例混合成水提液，过夜，水提液用4NNaOH或1NHCl将pH值调到7.0；以上培养基121℃高压蒸汽灭菌30min；2)菌悬液的制备菌体的普通培养：将OchrobactrumintermediumDN2接种到普通培养基中，32℃、120r/min摇床培养34h，获得普通培养液，10000r/min离心10min，收集菌体，用50mM，pH7.0的PBS将上述菌体配制菌悬液，获得普通培养的菌悬液；菌体的诱导培养：将32℃、120r/min条件下培养34h的普通培养液以5％的比例接入烟碱浓度为500mg/L的基础培养基中，30℃、120r/min摇床培养36h，然后将培养液10000r/min离心10min，收集菌体，用50mM，pH7.0PBS将上述菌体配制菌悬液，获得诱导培养的菌悬液；3)粗酶液的的制备采用以上方法获得的诱导培养菌悬液，按1000mL培养菌悬液加60mL50mM，pH7.0PBS缓冲液超声波破碎，超声波条件为400w，超声5s，间歇10s，90次，4℃、10000r/min离心10min，上清液即为粗酶液；4)烟碱的生物降解在复烤烟草中烟碱的生物降解为：用无菌水将复烤烟叶的水分调节到60％-85％后，将上述方法获得的普通培养菌悬液、诱导培养菌悬液或粗酶液以10-20％接种量接入复烤烟叶中，充分混匀菌体，于25～40℃固体发酵，每隔6h翻抖通气；或者在烟丝中烟碱的生物降解为：用无菌水将烟丝的水分调节到60％-85％后，将上述方法获得的普通培养菌悬液、诱导培养菌悬液或粗酶液以10-20％接种量接入烟丝中，充分混匀菌体，于25～40℃固体发酵，每隔6h翻抖通气；或者在烟草抽提液中烟碱的生物降解为：将上述方法获得的普通培养菌悬液、诱导培养菌悬液或粗酶液以10-20％接种量接入烟草抽提液中，30℃、120r/min摇床培养。