一种利用大肠杆菌生产人α防御素1蛋白的方法

摘要：

本发明提供了一种利用大肠杆菌生产生物活性物质人α防御素1蛋白的方法及其适用的优化设计DNA序列和重组表达质粒。包括：使用由人α防御素1成熟肽编码序列优化设计后获得的序列SEQ ID NO：1，构建成原核表达载体质粒pET32a-mHNP1，将质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，化学诱导表达人α-防御素1。本法可克服因α防御素1蛋白对宿主菌本身的毒害作用而引起的低表达甚至不表达，大量生产有活性的人α防御素1蛋白，满足有关结构、生化性质研究及抗体制备等方面的需要，也可应用于医药卫生领域。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510112983.9

申请日期：2005-10-18

公开/公告号：CN1810954

公开/公告日：2006-08-02

主分类号：C12N1/21(2006.01)I

申请/专利权人:甘肃亚盛盐化工业集团有限责任公司

发明/设计人:周长生;陈其新;李春丽;陈正华

主申请人地址:730030甘肃省兰州市城关区张掖路219号

专利代理机构:甘肃省专利服务中心

代理人:田玉兰%程 萍

国别省市代码:甘肃;62

权利要求：

1.一种利用大肠杆菌生产人α防御素1蛋白的方法，包括以下步骤：(1)使用SEQIDNO1所示的序列片段1<underscore>ATG</underscore>GCCTGCTATTGCCGTATTCCAGCCTGC31ATTGCAGGCGAACGTCGTTATGGCACCTGC61ATCTACCAGGGCCGTCTCTGGGCATTCTGC91TGC<underscore>TGATAAG</underscore>下划线为起始密码子或双终止密码子及侧翼序列(2)将上述基因序列插入T7型Trx融合表达载体中，获得重组质粒pET32a-mHNP1。(3)将pET32a-mHNP1导入匹配大肠杆菌中组成完整表达体系；(4)用异丙基硫代-β-D半乳糖糖苷诱导上述体系在菌体内表达人HNP1成熟蛋白。