一种同时检测A、B、C三组人轮状病毒的膜基因芯片及制备方法与应用
本发明公开了一种同时检测A、B、C三组人轮状病毒的膜芯片，包括带正电荷的尼龙膜和阵列式分布于玻璃基片上的寡核苷酸探针、对照和空白的点涂层，所述点涂层是6条不同组别的人轮状病毒组特异性检测探针，1条阳性对照探针，4条阴性对照探针以及空白点样液对照，并且所述的阳性对照探针5′端加地高辛标记。本发明还公开了所述芯片的制备方法及其作为临床诊断试剂的应用方法。本发明的芯片采用多重PCR扩增方式，使待检测核酸带上地高辛标记，通过免疫显色获取杂交结果，可同时用于对多组人轮状病毒的基因检测和组别鉴定，具有广阔的应用前景，有望满足食品卫生监测，疾病预防控制和临床医疗领域对人轮状病毒检测的需要。
发明专利
CN200510104338.2
2005-10-26
CN1810991
2006-08-02
C12Q1/68(2006.01)I
山东省医药生物技术研究中心
黄海燕;韩金祥;王健伟
250062山东省济南市经十路89号
济南圣达专利商标事务所
郑华清
山东;37
1.一种同时检测A、B、C三组人轮状病毒的膜基因芯片，包括尼龙膜基片和阵列式分布的寡核苷酸探针与对照及空白的点涂层，其特征在于，所述的尼龙膜基片是带正电荷的尼龙膜；所述的寡核苷酸探针与对照及空白的点涂层分布于尼龙膜基片上，包括6条不同组别的人轮状病毒组特异性检测探针，1条阳性对照探针，4条阴性对照探针以及空白点样液对照，其中，所述的6条人轮状病毒组特异性检测探针的基因序列是：ProbeA1：5′-ATTTATTGAATGCTTCGATAT-3′ProbeA2：5′-ACTGGTGAGTGGATTGTTTGA-3′ProbeB1：5′-ATCCCATTTGAGTAAATTCAG-3′ProbeB2：5′-ATGATAATTCAGCCAAGCC-3′ProbeC1：5′-CTGTATTAGCTACATGACCGT-3′ProbeC2：5′-AGCTATTGGAGTTTGGTAGTT-3′所述1条阳性对照探针的基因序列是：PbP：5′-ATTTATTGAATGCTTCGATAT-3′所述4条阴性对照探针的基因序列分别是：PbEC：5′-GATGAGAATGTGCCTTCGGGAA-3′PbSA：5′-GAACATATGTGTAAGTAACTGTGC-3′PbHBV：5′-AGAAAGACCTTTAACCTA-3′PbPSE：5′-TAGGTGGTTCAGCAAGTTGGAT-3′上述的阳性对照探针在其5′端带地高辛标记；上述每种探针与对照及空白的点涂层在尼龙膜基片表面点制2个平行点，各点的直径为0.25mm，点间距为0.8mm，点涂层微阵列的大小为4.5mm×5.5mm。