一种转基因烟草检测方法及试剂盒

摘要：

本发明公开了一种转基因烟草检测方法，包括(一)巢式PCR定性检测：获得可用于PCR反应的样本DNA，同时检测样本的花椰菜花叶病毒启动子调控序列CaMV 35s、根癌农杆菌终止子调控序列nos和抗卡那霉素选择标记基因序列NPT II，引物的核苷酸序列见序列表SEQ ID No.1至SEQ ID No.12；对检出为转基因阳性的样本，进一步采用：(二)荧光实时PCR定量检测和(三)目的基因PCR检测。本发明还公开了一种检测转基因烟草的试剂盒，由定性检测试剂、定量检测试剂和目的基因检测试剂组成。本发明的优点是：该方法重复性好，可靠性高，检测费用低，省时省力；试剂盒灵敏度高、特异性强、操作简便，便于实现转基因烟草检测的规范化。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510080395.1

申请日期：2005-07-04

公开/公告号：CN1718743

公开/公告日：2006-01-11

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:黑龙江省烟草科学研究所

发明/设计人:郭兆奎;张丽萍;万秀清;颜培强;李丽杰;范志新;魏继承;于艳华

主申请人地址:157011黑龙江省牡丹江市西地明街63号

专利代理机构:北京北新智诚知识产权代理有限公司

代理人:张爱群

国别省市代码:黑龙江;23

权利要求：

1.一种转基因烟草检测方法，其特征在于：(一)巢式PCR定性检测：获得可用于PCR反应的样本DNA，同时检测样本的花椰菜花叶病毒启动子调控序列CaMV35s、根癌农杆菌终止子调控序列nos和抗卡那霉素选择标记基因序列NPTII，引物的核苷酸序列见序列表SEQIDNo.1至SEQIDNo.12；对检出为转基因阳性的样本，进一步采用：(二)荧光实时PCR定量检测：采用花椰菜花叶病毒启动子调控序列CaMV35s通用引物和荧光标记探针，测定样本的荧光强度，矫正Ct值；并代入用梯度稀释的阳性对照得到的标准曲线方程，计算得出样本中转基因的量；CaMV35s定量检测的引物和探针的核苷酸序列见序列表SEQIDNo.13至SEQIDNo.15；及(三)目的基因PCR检测：采用烟草马铃薯Y病毒复制酶基因、烟草马铃薯Y病毒外壳蛋白基因、烟草普通花叶病外壳蛋白基因、烟草黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因、烟草普通花叶病复制酶基因、苏云金杆菌杀虫蛋白BT-cryIA(c)基因的PCR扩增引物，对定性检测为阳性的样本进行目的基因扩增，测定样本所转入基因的种类，引物的核苷酸序列见序列表SEQIDNo.16至SEQIDNo.27。