一种磁性微球分离纯化纳豆激酶的方法

摘要：

本发明提供了一种磁性微球分离纯化纳豆激酶的方法。将表面偶联有亲和配基的磁性微球加入到纳豆激酶的发酵液中，在室温下缓慢搅拌充分混合，使纳豆激酶特异性地吸附在磁性微球表面；采用磁铁将吸附有纳豆激酶的磁性微球从发酵液中分离出来，用缓冲溶液清洗一次去除杂质，再用解析液进行解析，收集到纳豆激酶的洗脱液；最后经过冷冻干燥得到纳豆激酶产品。分离后纳豆激酶的活力为85％，纯化因子为6.0。本发明具有周期短、操作简单、生产成本低且易于规模化生产等优点。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510075057.9

申请日期：2005-06-08

公开/公告号：CN1876810

公开/公告日：2006-12-13

主分类号：C12N9/12(2006.01)I

申请/专利权人:中国科学院过程工程研究所

发明/设计人:阳承利;邢建民;官月平;刘会洲

主申请人地址:100080北京市海淀区中关村北二条1号

国别省市代码:北京;11

权利要求：

权利要求书1 一种磁性微球分离纯化纳豆激酶的方法，其特征在于，所述的纳豆激酶分离纯化方法包括以下几个步骤：(1)纳豆激酶发酵液的制备从固体培养基上挑取纳豆激酶的单菌落接入20-100mL的种子培养基中，摇床中培养12-24h，按2％-6％接种量接入发酵液体培养基中，在25-37℃下发酵罐培养24-48h，液体发酵结束后，通过离心除去菌体，得到纳豆激酶发酵液；(2)亲和配基在磁性微球上的固定化将自制的磁性高分子微球进行表面功能化修饰得到表面含有环氧功能基团的磁性微球，在50-80℃条件下，以氢氧化钠为催化剂，进行亲和配基的固定化反应，获得表面含有亲和配基的磁性微球；(3)采用磁性微球从发酵液中分离纳豆激酶将表面含有亲和配基的磁性微球加入到纳豆激酶的发酵液中，在室温下缓慢搅拌充分混合30分钟，使纳豆激酶特定地吸附在磁性微球表面，采用磁铁将吸附有纳豆激酶的磁性微球从发酵液中分离出来，用缓冲溶液清洗一次去除杂质，再用解析液进行解析，收集到纳豆激酶的洗脱液，洗脱液保存在0-10℃条件下。